結(jié)合逆轉(zhuǎn)錄酶（RTase）產(chǎn)品說明書
1. 檢測原理
PERT 技術(shù)：結(jié)合逆轉(zhuǎn)錄酶（RTase）催化 RNA 模板合成 cDNA，通過 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物并實(shí)時監(jiān)測熒光信號（SYBR Green 染料標(biāo)記）。
特異性設(shè)計：以 MS2 RNA 為模板，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線定量逆轉(zhuǎn)錄酶活性，間接反映樣本中逆轉(zhuǎn)錄病毒污染水平。
2. 靈敏度
檢測下限：可檢測低至 10⁻⁸ 單位 / 微升 的逆轉(zhuǎn)錄酶活性（如 AMV-RTase 或 MMLV-RTase）。
病毒顆粒關(guān)聯(lián)：約 10³ 皮單位（pU）逆轉(zhuǎn)錄酶活性 對應(yīng) 70-80 個逆轉(zhuǎn)錄酶分子或 1-10 個病毒粒子。
3. 線性范圍
標(biāo)準(zhǔn)曲線：覆蓋 10⁻³ 至 10⁻⁸ 單位 / 微升（5 個數(shù)量級），適用于不同病毒污染水平的樣本。
定量準(zhǔn)確性：通過 Log ΔRn 相對定量參數(shù)，Ct 值與逆轉(zhuǎn)錄酶濃度呈強(qiáng)相關(guān)性。
4. 特異性
抗干擾設(shè)計：加入肝素抑制 DNA 聚合酶活性，避免細(xì)胞 DNA 污染導(dǎo)致的假陽性。
病毒類型覆蓋：適用于多種逆轉(zhuǎn)錄病毒（如 HIV、HTLV 等）的活性檢測。
5. 準(zhǔn)確性
內(nèi)參校正：通過標(biāo)準(zhǔn)品建立的線性關(guān)系計算樣本濃度，誤差范圍小。
污染控制：操作需在 RNA 酶 - free 環(huán)境中進(jìn)行，使用帶濾芯槍頭避免交叉污染。
6. 檢測限
定性檢測限：單管可檢測單個逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒的活性。
定量檢測限：基于熒光閾值（Ct 值）和標(biāo)準(zhǔn)曲線，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)定量。
7. 精密度
批內(nèi)重復(fù)性：同一樣本多次檢測變異系數(shù)低（需標(biāo)準(zhǔn)化操作流程）。
批間一致性：不同批次試劑性能穩(wěn)定（需參考產(chǎn)品說明書驗(yàn)證）。
8. 操作便捷性
一步式操作：逆轉(zhuǎn)錄與 PCR 擴(kuò)增在同一管內(nèi)完成，減少移液步驟。
時間效率：總耗時約 3-4 小時（含孵育和 PCR 擴(kuò)增）。
儀器兼容性：適配主流熒光定量 PCR 儀（如 ABI、Roche 等）。
9. 樣本類型
適用范圍：生物制品（如疫苗）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、細(xì)胞裂解液等。
特殊要求：需低溫操作（4℃）以保護(hù)酶活性，避免反復(fù)凍融。
注意事項(xiàng)
RNA 質(zhì)量：樣本 RNA 完整性影響檢測結(jié)果，需確保 RNA 無降解。
假陽性控制：細(xì)胞 DNA 污染可能導(dǎo)致非特異性信號，需通過肝素抑制 DNA 聚合酶。
法規(guī)合規(guī)：符合 WHO 及《中國藥典》對生物制品逆轉(zhuǎn)錄病毒污染的檢測要求。
注：具體參數(shù)可能因試劑盒批次和實(shí)驗(yàn)條件略有差異，建議嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書操作并進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
PERT 技術(shù)：結(jié)合逆轉(zhuǎn)錄酶（RTase）催化 RNA 模板合成 cDNA，通過 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物并實(shí)時監(jiān)測熒光信號（SYBR Green 染料標(biāo)記）。
特異性設(shè)計：以 MS2 RNA 為模板，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線定量逆轉(zhuǎn)錄酶活性，間接反映樣本中逆轉(zhuǎn)錄病毒污染水平。
2. 靈敏度
檢測下限：可檢測低至 10⁻⁸ 單位 / 微升 的逆轉(zhuǎn)錄酶活性（如 AMV-RTase 或 MMLV-RTase）。
病毒顆粒關(guān)聯(lián)：約 10³ 皮單位（pU）逆轉(zhuǎn)錄酶活性 對應(yīng) 70-80 個逆轉(zhuǎn)錄酶分子或 1-10 個病毒粒子。
3. 線性范圍
標(biāo)準(zhǔn)曲線：覆蓋 10⁻³ 至 10⁻⁸ 單位 / 微升（5 個數(shù)量級），適用于不同病毒污染水平的樣本。
定量準(zhǔn)確性：通過 Log ΔRn 相對定量參數(shù)，Ct 值與逆轉(zhuǎn)錄酶濃度呈強(qiáng)相關(guān)性。
4. 特異性
抗干擾設(shè)計：加入肝素抑制 DNA 聚合酶活性，避免細(xì)胞 DNA 污染導(dǎo)致的假陽性。
病毒類型覆蓋：適用于多種逆轉(zhuǎn)錄病毒（如 HIV、HTLV 等）的活性檢測。
5. 準(zhǔn)確性
內(nèi)參校正：通過標(biāo)準(zhǔn)品建立的線性關(guān)系計算樣本濃度，誤差范圍小。
污染控制：操作需在 RNA 酶 - free 環(huán)境中進(jìn)行，使用帶濾芯槍頭避免交叉污染。
6. 檢測限
定性檢測限：單管可檢測單個逆轉(zhuǎn)錄病毒顆粒的活性。
定量檢測限：基于熒光閾值（Ct 值）和標(biāo)準(zhǔn)曲線，實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)定量。
7. 精密度
批內(nèi)重復(fù)性：同一樣本多次檢測變異系數(shù)低（需標(biāo)準(zhǔn)化操作流程）。
批間一致性：不同批次試劑性能穩(wěn)定（需參考產(chǎn)品說明書驗(yàn)證）。
8. 操作便捷性
一步式操作：逆轉(zhuǎn)錄與 PCR 擴(kuò)增在同一管內(nèi)完成，減少移液步驟。
時間效率：總耗時約 3-4 小時（含孵育和 PCR 擴(kuò)增）。
儀器兼容性：適配主流熒光定量 PCR 儀（如 ABI、Roche 等）。
9. 樣本類型
適用范圍：生物制品（如疫苗）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、細(xì)胞裂解液等。
特殊要求：需低溫操作（4℃）以保護(hù)酶活性，避免反復(fù)凍融。
注意事項(xiàng)
RNA 質(zhì)量：樣本 RNA 完整性影響檢測結(jié)果，需確保 RNA 無降解。
假陽性控制：細(xì)胞 DNA 污染可能導(dǎo)致非特異性信號，需通過肝素抑制 DNA 聚合酶。
法規(guī)合規(guī)：符合 WHO 及《中國藥典》對生物制品逆轉(zhuǎn)錄病毒污染的檢測要求。
注：具體參數(shù)可能因試劑盒批次和實(shí)驗(yàn)條件略有差異，建議嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書操作并進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
標(biāo)簽：
結(jié)合逆轉(zhuǎn)錄酶（RTase）
- Mitomycin C的作用機(jī)制及在腫瘤細(xì)胞系和動物模型中的多場景應(yīng)用
- CFDA-SE的作用機(jī)制及在細(xì)胞增殖和體內(nèi)示蹤中的應(yīng)用
- 抑制劑A83-01的作用機(jī)制及在干細(xì)胞與類器官培養(yǎng)中的應(yīng)用
- 2-Deoxy-D-glucose（2-DG）的作用機(jī)制及在糖酵解抑制研究中的作用
- 鈣離子熒光探針Calbryte 520.AM在動態(tài)監(jiān)測中的核心優(yōu)勢與應(yīng)用解析
- NRF2和AKT激活或FBP1缺失在肝細(xì)胞衰老和肝癌進(jìn)展中的作用
- 多肽的功能和應(yīng)用及其固相合成技術(shù)
- 鐵死亡抑制劑Ferrostatin-1的作用機(jī)制與應(yīng)用
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網(wǎng) 電話：021-64166852;13621656896 E-mail：info@bio-equip.com