新免疫檢查點 HLA-E 及其相應機制在腫瘤免疫中的應用
免疫監視學說認為免疫系統就像一支 “作戰優良” 的部隊一般，能夠持續地監視體內出現的異常細胞，識別并摧毀它們。同樣地，免疫系統可通過癌癥免疫周期 (Cancer-Immunity Cycle , CIC) 對抗殺死部分腫瘤細胞（可參考往期推文：免疫治療之非小細胞肺癌）。可腫瘤細胞似乎有 “免死金牌” 一般，總神奇般 “死灰復燃”，人們對此很是困惑。直到 2006 年，Allison 提出免疫檢查點，指程序性死亡受體及其配體，存在于免疫系統中，擔負著上調或下調免疫系統信號的作用 (可參考往期推文：免疫檢查點大組團，誰能 “C 位出道”)[1]。
簡單來說，凡是可以影響免疫反應的重要靶點，都屬于免疫檢查點。最家喻戶曉的免疫檢查點便是 2018 年榮獲諾貝爾獎的 PD-1 和 CTLA-4，其具有免疫抑制功能，隨后腫瘤免疫治療開始進入廣大群眾的視野。這不，研究人員又發現了 HLA-E 這一新的免疫檢查點，讓我們來一探究竟~
新的突破， HLA-E
看到下面這張圖，是否又重新喚起了你兒時的記憶，NO，NO，NO，這可是 Cancer Cell 的期刊封面。近期，四川大學華西醫院團隊發表題為 “Immune checkpoint HLA-E: CD94-NKG2A mediates evasion of circulating tumor cells from NK cell surveillance” 的封面研究論文[2。
Cancer Cell 封面（圖片來源：Cancer Cell 期刊官網）
對于腫瘤細胞與不同類型的免疫細胞之間的免疫檢查點分子對及 ICBs 的研究，大多聚焦于實體腫瘤原發病灶或轉移灶中，對 CTCs 中腫瘤細胞的免疫監視探索很少關注。在這篇文章中，該團隊發現了循環腫瘤細胞 (CTC) 與 NK 細胞間的一種新的免疫檢查點-- HLA-E，闡述了 CTC 通過免疫檢查點分子對 HLA-E: CD94-NKG2A 逃避 NK 細胞監視的新機制[2]。作者巧妙地選取了西游記作為封面素材，將 CTC 喻為各路偽裝的妖精，通過扮弱等 “綠茶” 手段騙取唐三藏 (血小板) 的信任，并誤導豬八戒 (HLA-E) 來保護自己，阻止孫悟空 (NKs) 對妖精 (CTC) 的攻擊。形象生動地循解釋了 CTCs 與 NK 細胞之間的相互作用。■ 移動的 "種子"
循環腫瘤細胞 CTC1869 年，Ashworth 首次提出循環腫瘤細胞 (Circulating tumor cells, CTCs) 的概念[3]，目前是指存在于外周血中的各類腫瘤細胞。血液循環是腫瘤從原發病灶向遠處器官擴散的主要徑[4]。CTC 就像一粒 “種子”，通過血液循環，經侵襲、內滲、循環、外滲和定殖5個步驟，最終發展成為惡性腫瘤 (圖 1)。
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圖 1. 血液傳播過程中 CTC-血液相互作用示意圖[5]
■ 發現及驗證
CTC 中新的免疫檢查點分子對 HLA-E: CD94-NKG2A為研究 CTCs 的相關轉移機制，采集了胰腺導管腺癌患者的原發性腫瘤、肝轉移灶以及肝門靜脈 (hepatic portal vein, HPV) 中的血液進行活檢，并利用單細胞測序技術 (scRNA-seq) 等技術，分析其轉錄組學特征和基因表達差異 (圖 2A)。結果顯示，血液循環中觀察到 CTCs 和 NK 細胞之間存在主要相互作用，其中 HLA-E 和 CD94-NKG2 在 CTC 和 NK 細胞之間具有最強烈的免疫相互作用 (圖 2B)。
進一步的研究發現，大多數 NK 細胞都含有這種免疫抑制受體 NKG2A，且 CTC 中 HLA-E 的表達水平高于實體病變腫瘤細胞中的表達水平 (圖 2C-E)。因此，血液中 NKG2A 和 HLA-E 之間上調的相互作用可能是由 HLA-E 分子水平的增加驅動的
[2。
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圖 2. HLA-E: CD94-NKG2A 免疫檢查點分子對的發現[2]
A: 機制研究方案；B: 不同來源腫瘤細胞與 NK 細胞間的免疫檢查點分子對；C-E: HLA-E 在不同來源腫瘤細胞上的表達。
隨后，為驗證 CTC 中 HLA-E 的免疫檢查點功能，在體外進行了 NK 細胞毒性實驗，在體內構建尾靜脈小鼠模型來模擬 CTC 介導的轉移，通過使用特異性抗體 Monalizumab 阻斷 NKG2A 或敲低 HLA-E 來中斷免疫檢查點。體內外分析表明，CTC 和 NK 細胞通過免疫檢查點分子對 HLA-E: CD94-NKG2A 相互作用。通過阻斷 NKG2A 或敲低 HLA-E 表達來破壞這種相互作用可增強 NK 介導的體外腫瘤細胞殺傷作用，并防止體內腫瘤轉移(圖 3)。
圖 3. HLA-E: CD94-NKG2A 的體內外功能驗證[2]
A: 體外細胞毒性實驗；B: 體內尾靜脈模型中肺轉移情況。
■ 機制探究
CTC 通過參與血小板來源的 RGS18 上調免疫檢查點分子 HLA-E那么 CTCs 是如何動員 HLA-E 的呢？研究人員評估了可能與 HLA-E 表達水平呈正相關的差異表達基因。觀察到 RGS18 并非在原發和轉移病灶的腫瘤細胞中表達，而是幾乎只在 CTC 中表達。眾所周知，CTC 通常被血小板覆蓋，而血小板是 RGS18 蛋白的主要來源
[6]。機制研究表明，血小板源性 RGS18 通過 AKT-GSK3b-CREB 信號通路促進 HLA-E 的表達，RGS18 過表達促進胰腺腫瘤肝轉移 (圖 4)。
圖 4. CTC 通過 HLA-E: CD94-NKG2A 逃避 NK 細胞的監視[2]
機制探討：
1.當向血管內灌注 CTC 時，CTC 會粘附并攝取攜帶 RGS18 的血小板。2.RGS18 抑制宿主細胞中 p-AKT 的活化，進而抑制 GSK3β Ser9 的磷酸化而穩定 GSK3β 蛋白。3.
GSK3β 蛋白通過 CREB1的 Ser133 位點磷酸化促進 CREB1 的核轉位。
4.
CREB1 與細胞核內 HLA-E 基因啟動子區 SXY 位點結合，上調 CTC 表面 HLA-E 表達和易位。
5.NK 細胞表面 HLA-E 與 NK 細胞表面的 CD94-NKG2A 相互作用，激活細胞內的磷酸酶 SHP1，抑制 NK 細胞的殺傷活性。
說了這么多，免疫檢查點這一 “香餑餑” 究竟有何用處呢？言至于此，便不得不提免疫檢查點阻斷 (Immune checkpoint blockade, ICB) 療法，指的是基于程序性死亡受體及其配體的免疫檢查點的阻斷療法，通過抑制二者的結合，釋放免疫抑制調節，恢復T淋巴細胞的腫瘤特異性細胞毒性，從而提高宿主免疫系統對腫瘤細胞的攻擊性
[7,8]
。ICB 已經為多種類型癌癥的治療帶來了翻天覆地的變化，在過去的這些年，針對 PD-1 和 CTLA-4，FDA 已批準了 9 種阻斷免疫檢查點的單克隆抗體藥物，包括 7 個 PD-1/PD-L1，2 個 CTLA-4 單抗，用于 20 多種適應癥，包括轉移性黑色素瘤、非小細胞肺癌、腎癌、肝細胞癌等 (表 1)
[9]
。
近年，一些新的免疫檢查點分子包括 TIM-3、VISTA 和 LAG-3 等也被引入研究。例如，許多臨床試驗 (如 NCT03470922) 評估了不同的阻斷 LAG-3 的方法聯合抗 PD-1 治療作為潛在的新型 ICBs
[10]
，經過不懈努力，最終 Relatlimab 于 2022 年 3 月首次獲得美國 FDA 批準治療黑色素瘤，成為首款獲批上市的抗 LAG-3 抑制劑。
| 藥物名稱 | 靶點 | 具體癌種 |
| Pembrolizumab | PD-1 | 晚期子宮內膜癌 (2022); 晚期腎細胞癌 (2021); 高危早期三陰性乳腺癌 (2021) 等 |
| Nivolumab | PD-1 | 尿路上皮癌 (2021); 不可切除的惡性胸膜間皮瘤(2020); 黑素瘤 (2017) 等 |
| Atezolizumab | PD-L1 | 轉移性黑素瘤 (2020); 肺泡軟部肉瘤 (2022); 廣泛期小細胞肺癌 (2019) 等 |
| Durvalumab | PD-L1 | 轉移性膽道癌(2022); 不可切除的肝細胞癌(2022); 廣泛期小細胞肺癌 (2020) 等 |
| Tremelimumab | CTLA-4 | 不可切除的肝細胞癌 (2022); 轉移性非小細胞肺癌(2022) 等 |
| Ipilimumab | CTLA-4 | 不可切除的惡性胸膜間皮瘤 (2020); 肝細胞癌(2020) 等 |
| Relatlimab | LAG-3 | 轉移性黑素瘤 (2022) |
| Avelumab | PD-L1 | 腎細胞癌 (2019) 等 |
| Cemiplimab | PD-L1 | 轉移性基底細胞癌 (2021) 等 |
| Dostarlimab-gxly | PD-L1 | dMMR 子宮內膜癌 (2023) 等 |
表 1. 美國 FDA 已經獲批上市的免疫檢查點阻斷藥物
（圖片來源：FDA 官網[11]）
■ 小結
小 M 帶大家進一步了解了腫瘤免疫中 “響當當” 的免疫檢查點，并詳細介紹了新的免疫檢查點 -- HLA-E 及其相應機制。其次，基于免疫檢查的阻斷療法給腫瘤免疫之路帶來的曙光，針對經典免疫檢查點的藥物已獲批上市，多種新型免疫檢查點百花齊放，共同對抗腫瘤這個“大魔頭”。
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相關產品 |
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Monalizumab 是一種靶向自然殺傷細胞群 2A (NKG2A) 的免疫檢查點抑制劑。Monalizumab 是一種人源化抗 NKG2A 的單克隆抗體，可增加 IFN-γ 產生，從而促進自然殺傷細胞功能。Monalizumab 可用于頭頸部鱗狀細胞癌 (HNSCC) 的研究。 |
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BMS-1166 是一種有效的 PD-1/PD-L1 免疫檢查點抑制劑。BMS-1166 誘導 PD-L1 二聚化并阻斷其與 PD-1 的相互作用，IC50 為 1.4 nM。BMS-1166 拮抗 PD-1/PD-L1 免疫檢查點對 T 細胞活化的抑制作用。 |
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Tuvonralimab (PSB-205; QL1706) 是一種雙重免疫檢查點阻斷劑，包含有抗 PD-1 IgG4 和抗 CTLA-4 IgG1 抗體、Iparomlimab 和 Tuvonralimab。 |
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CA-170 是一種口服的 VISTA 和 PD-L1 雙重抑制劑。CA-170 對 PD-L1/L2 和 VISTA 抑制的 T 細胞的增殖和效應因子功能具有有效的拯救作用，選擇性優于其他免疫檢查點蛋白以及廣泛的受體和酶。 |
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BMS-37 是一種 PD-1/PD-L1 免疫檢查點抑制劑。BMS-37 可作為 PD-L1 配體合成 PROTAC 分子。 |
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參考文獻
[1] Korman AJ, et al. Checkpoint blockade in cancer immunotherapy. Adv Immunol. 2006;90:297-339.
[2] Liu X, et al. Immune checkpoint HLA-E: CD94-NKG2A mediates evasion of circulating tumor cells from NK cell surveillance. Cancer Cell. 2023;41(2):272-287.e9.
[3] Ignatiadis M, et al. Circulating tumor cells and circulating tumor DNA for precision medicine: dream or reality?. Ann Oncol. 2014;25(12):2304-2313.
[4] Ganesh K, et al. Targeting metastatic cancer. Nat Med. 2021;27(1):34-44.
[5] Ward MP, et al. Platelets, immune cells and the coagulation cascade; friend or foe of the circulating tumour cell?. Mol Cancer. 2021;20(1):59. Published 2021 Mar 31.
[6] Ward MP, et al. Platelets, immune cells and the coagulation cascade; friend or foe of the circulating tumour cell?. Mol Cancer. 2021;20(1):59. Published 2021 Mar 31.
[7] Tang J, et al. Trial watch: The clinical trial landscape for PD1/PDL1 immune checkpoint inhibitors. Nat Rev Drug Discov. 2018;17(12):854-855.
[8] Sanmamed MF, et al. A Paradigm Shift in Cancer Immunotherapy: From Enhancement to Normalization. Cell. 2018;175(2):313-326.
[9] Twomey JD, et al. Cancer Immunotherapy Update: FDA-Approved Checkpoint Inhibitors and Companion Diagnostics. AAPS J. 2021;23(2):39. Published 2021 Mar 7.
[10] Morad G, et al. Hallmarks of response, resistance, and toxicity to immune checkpoint blockade. Cell. 2021;184(21):5309-5337.
[10] https://www.fda.gov/search?s=Dostarlimab-gxly&sort_bef_combine=rel_DESC
點擊化學：https://www.medchemexpress.cn/click-chemistry.html
