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MHC Class I類五聚體在器官手術移植配型的應用

瀏覽次數:4050 發布日期:2021-2-4  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
器官移植手術的關鍵是手術前的基因配型,一般地,配型只需檢測血液就可完成,患者血型和組織相容性是否與供體相配是決定器官移植成功與否的一個關鍵。即便配型合適,組織移植時,還是可能會出現排斥反應。
 
排斥反應的本質是細胞表面的同種異型抗原誘導的一種免疫應答,而這種代表個體特異性的同種異型抗原稱組織相容性抗原,其中能引起強而迅速排斥反應的抗原稱為主要組織相容性抗原(major histocompatibility antigen,MHA)。那么什么是MHC呢?
 
所有物種中,編碼MHA的基因是位于某一染色體的一組緊密連鎖的基因群,統稱為主要組織相容性抗原復合體(major histocompatibility complex,MHC)。MHC分子一般也指的是MHA,也即MHC編碼的蛋白質,根據其化學結構和功能的不同,可分為MHC I、MHC II和MHC III類分子。MHC I和MHC II類分子具有相似的結構,在免疫反應中發揮抗原遞呈作用。其中經典的I、 II類具有抗原遞呈功能,其它一般不具備激活T細胞的功能。
 
 
 
小鼠的MHC被稱為H-2(histocompatibility-2,H-2)
 
人類的MHC被稱為HLA(human leukocyte antigen,HLA)
 
今天我們先說說MHC I類——
 
MHC I結構:由一條α鏈和一條β鏈通過非共價結合而成,分為胞外區、跨膜區和胞內區,α鏈為跨膜蛋白,胞外區有α1、α2、α3三個結構域,α1、α2組成肽結合區(結合抗原肽--大多由8-11個氨基酸組成),α3和T細胞表面的CD8分子結合,β鏈是可溶性的β2m微球蛋白。
 
 
MHC I類分子生物學功能:介導內源性抗原(包括腫瘤細胞內合成的腫瘤抗原、病毒感染細胞合成的病毒蛋白等)的抗原提呈過程,過程包括抗原降解、抗原肽轉運、MHC I類分子裝配與荷肽、MHC I-肽復合物表達于細胞表面。
 
抗原降解:細胞質中的蛋白質,包括由內質網轉移至細胞質的部分膜蛋白和分泌蛋白,在泛素的幫助下,通過蛋白酶體系統的降解途徑將抗原降解為短肽。
 
抗原肽轉運:由蛋白酶體降解形成的抗原肽,需要被轉運至內質網中,才能與其中的MHC I類分子發生結合,這個轉運過程是由內質網膜上的抗原加工轉運相關蛋白(transport associated with antigen processing,TAP)所完成,TAP由兩個亞單位TAP1和TAP2組成。TAP對肽段的轉運具有一定的選擇性,可將較適合MHC I類分子結合的肽從胞漿轉運至內質網腔。
 
MHC I類分子裝配與荷肽:MHC I分子與抗原肽的結合過程簡稱荷肽,粗面內質網中新合成的MHC I類分子α鏈進入光面內質網,在輔助蛋合幫助下折疊成立體結構并與β2m結合。當抗原肽通過TAP進入內質網時,合適的肽就與MHC  I類分子結合。與肽結合形成肽-MHC I類分子復合物后,穩定地附著在內質網膜上,進一步通過高爾基體胞吐空泡運送到細胞表面,小泡的膜與細胞膜融合,肽-MHC I復合物即穩定地表達于細胞膜表面。
 
MHC I-肽復合物表達于細胞表面:MHC I類分子必須與抗原肽結合,才能在細胞表面穩定地表達,并進一步將抗原遞呈給CD8+T細胞識別。
 
 
MHC I類五聚體技術就是利用了MHC I分子在與抗原肽結合后與抗原特異性CD8+T受體(TCR)相結合,通過流式細胞術檢測熒光素信號作為readout,進而可以得知特異性結合抗原肽的CD8+T細胞群的比例并可利用分選儀將這些細胞分離出來,達到檢測和篩選CD8+T細胞的目的。MHC I類五聚體技術只是將MHC I分子從自然狀態下細胞表面分布變成了可溶性蛋白分子,以及將自然狀態下的單體變成了五聚體以提高分子結合的穩定性。而且MHC I五聚體標記靈活,有生物素標記和熒光素標記,整體熒光素亮度更高,穩定性更好。
 
MHC-肽復合物(肽:紅色、MHC:深藍色),卷曲螺旋結構域(淺藍色),熒光素標記(粉色)
 
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