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使用CytoFLEX流式細胞儀檢測囊泡/外泌體

瀏覽次數(shù):9408 發(fā)布日期:2016-1-21  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負

囊泡/外泌體天然存在于體液中,并穩(wěn)定攜帶了一些重要的信號分子。囊泡/外泌體相關(guān)功能的研究已經(jīng)成為研究熱點,并有望在多種疾病的早期診斷中發(fā)揮作用。

通常,因流式細胞儀無法檢測低于 250nm 的顆粒,因而并不是檢測囊泡/外泌體微顆粒的最佳選擇。而貝克曼庫爾特公司的 CytoFLEX 流式細胞儀的問世,為流式檢測囊泡/外泌體微顆粒開辟了蹊徑。

CytoFLEX是第一臺可檢測100 nm微顆粒的流式細胞儀,并具有可同時檢測13色熒光、單個樣本存儲量大等優(yōu)秀性能,為微顆粒的檢測提供了理想的檢測平臺。

材料與方法

1.試劑

2.樣本制備


數(shù)據(jù)分析

1.建立FSC / VSSC散點圖,檢測Megamix-Plus FSC beads(100, 160, 200, 240, 300, 500, 900 nm),調(diào)整gain值。圈定100 nm - 900nm微顆粒分布區(qū)域,設定門MP Gate。同樣電壓條件下,樣本檢測管分布于MP Gate門內(nèi)的即為囊泡/外泌體微顆粒;
2.建立AnnexinV-FITC/APC雙參數(shù)散點圖,通過AnnexinV表達量的多少,區(qū)分不同類型的微顆粒。并建立CD63-PE/CD41-PC7雙參數(shù)的散點圖,來檢測不同類型的囊泡/外泌體微顆粒,細胞表面抗原的不同。
*實驗數(shù)據(jù)由Kaluza軟件分析

結(jié)果

1. Megamix-Plus FSC beads 檢測結(jié)果

根據(jù)微球(100, 160, 200, 240, 300, 500, 900 nm)的分布,界定微顆粒的位置,將門命名為”MP Gate”。

2. 囊泡/外泌體微顆粒檢測結(jié)果

圖A中MP Gate顯示囊泡/外泌體微顆粒;圖B和C為相應熒光通道中,微顆粒的自發(fā)熒光;圖D中顯示兩群Annexin-V陽性細胞群標記囊泡/外泌體微顆粒。Annexin-V dim在圖中用綠色顯示,該群微顆粒表達CD41不表達或低表達CD63,且細胞較小;Annexin-V high在圖中用紅色顯示,該群微顆粒表達CD41+CD63+,且細胞相對較大。

發(fā)布者:貝克曼庫爾特生命科學
聯(lián)系電話:400 168 5267
E-mail:apls@beckman.com

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