抗體的保存方法及注意事項(xiàng)
抗體的保存方法一般會(huì)直接影響抗體的活性和使用效果。在保存得當(dāng)?shù)那闆r下，大部分抗體可以存放數(shù)月甚至數(shù)年，一般情況需嚴(yán)格按照抗體說明書來進(jìn)行保存。
一、抗體保存溫度和條件
1、抗體收到后，需在12000rpm離心1~5分鐘，再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存，如果抗體體積不足50 ul，可延長離心時(shí)間至 5 分鐘，從而確保抗體全部離心下來。
2、 對(duì)于多數(shù)抗體而言，分裝成小等份并凍存于-20℃或-80℃是最佳選擇。腹水形式的產(chǎn)品收到后需立即凍存，因?yàn)樵擃惍a(chǎn)品含有大量的蛋白酶，長期在置于4℃條件會(huì)導(dǎo)致抗體的降解。
分裝成小等份可最大程度減少由凍融造成的損傷，以及從單個(gè)試劑瓶中多次吸取而引入的污染。
小等份只需凍融一次，如有剩余，可將剩余物保存于4℃。小等份的量取決于實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)中通常采用的量。小等份應(yīng)不小于10μl；等份越小，儲(chǔ)液濃度因抗體蒸發(fā)及吸附于保存瓶表面而受到的影響越大。
抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完，在4℃盡量不要超過1天。
3、 抗體的運(yùn)輸：一般選擇4℃運(yùn)輸，避免了反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害；如若選擇干冰運(yùn)輸，收到抗體是冰凍的，分裝時(shí)解凍，會(huì)增加一次凍融的過程，所以運(yùn)輸過程中盡量避免干冰運(yùn)輸。
二、特殊抗體保存條件
酶聯(lián)抗體：保存在4℃，避免凍存以降低或喪失酶活性；
偶聯(lián)抗體：需保存在棕色管或是用錫箔紙避光于4℃保存，熒光抗體對(duì)光敏感，操作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格避光；
IgG3的同型對(duì)照：保存于4℃避免凍存，反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體變性，形成多聚體；
三、抗體保存注意事項(xiàng)：
1、加入甘油：對(duì)于大多數(shù)抗體，可加入50%的甘油來避免反復(fù)凍融。甘油在-20℃可降低冰點(diǎn)，但不建議加入甘油的抗體保存于-80℃，該溫度已經(jīng)超過了甘油的冰點(diǎn)；
2、 加蛋白保護(hù)劑：蛋白在高濃度時(shí)不易降解，正如有些抗體會(huì)加入BSA作為穩(wěn)定劑的原因，同時(shí)加入蛋白也可減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標(biāo)記的話，則不能加入蛋白穩(wěn)定劑，因?yàn)檫@些穩(wěn)定劑會(huì)和抗體一起競爭結(jié)合標(biāo)記物。
3、加入疊氮化鈉：為了防止微生物污染，經(jīng)常選擇加入疊氮化鈉到抗體中（終濃度 0.02% (w/v)）。但在下述情況中不能使用疊氮化鈉：
抗體用于染色或處理活細(xì)胞，用于體內(nèi)研究。疊氮化鈉在抵抗微生物的同時(shí)，對(duì)其它大部分有機(jī)物也是有毒的，因?yàn)樗钄嗔司�粒體的 細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng)cytochrome electron transportsystem。
要偶聯(lián)帶有氨基的抗體。疊氮化鈉會(huì)干擾任何含有氨基的偶聯(lián)，因此在進(jìn)行偶聯(lián)之前，應(yīng)將疊氮化鈉去除。偶聯(lián)后的抗體可以加入疊氮化鈉保存，但是濃度只能是0.01％。對(duì)于需要偶聯(lián)的抗體，硫柳汞 (merthiolate)可以替代疊氮化鈉作為保護(hù)劑。
此外，如果需要去除疊氮化鈉，可以通過凝膠電泳或過濾的方式（IgG 的分子量是 150kDa，疊氮化鈉的分子量只有65Da），使用cut off 14kDa的濾膜即可將疊氮化鈉從抗體中去除。
一、抗體保存溫度和條件
1、抗體收到后，需在12000rpm離心1~5分鐘，再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存，如果抗體體積不足50 ul，可延長離心時(shí)間至 5 分鐘，從而確保抗體全部離心下來。
2、 對(duì)于多數(shù)抗體而言，分裝成小等份并凍存于-20℃或-80℃是最佳選擇。腹水形式的產(chǎn)品收到后需立即凍存，因?yàn)樵擃惍a(chǎn)品含有大量的蛋白酶，長期在置于4℃條件會(huì)導(dǎo)致抗體的降解。
分裝成小等份可最大程度減少由凍融造成的損傷，以及從單個(gè)試劑瓶中多次吸取而引入的污染。
小等份只需凍融一次，如有剩余，可將剩余物保存于4℃。小等份的量取決于實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)中通常采用的量。小等份應(yīng)不小于10μl；等份越小，儲(chǔ)液濃度因抗體蒸發(fā)及吸附于保存瓶表面而受到的影響越大。
抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完，在4℃盡量不要超過1天。
3、 抗體的運(yùn)輸：一般選擇4℃運(yùn)輸，避免了反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害；如若選擇干冰運(yùn)輸，收到抗體是冰凍的，分裝時(shí)解凍，會(huì)增加一次凍融的過程，所以運(yùn)輸過程中盡量避免干冰運(yùn)輸。
二、特殊抗體保存條件
酶聯(lián)抗體：保存在4℃，避免凍存以降低或喪失酶活性；
偶聯(lián)抗體：需保存在棕色管或是用錫箔紙避光于4℃保存，熒光抗體對(duì)光敏感，操作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格避光；
IgG3的同型對(duì)照：保存于4℃避免凍存，反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體變性，形成多聚體；
三、抗體保存注意事項(xiàng)：
1、加入甘油：對(duì)于大多數(shù)抗體，可加入50%的甘油來避免反復(fù)凍融。甘油在-20℃可降低冰點(diǎn)，但不建議加入甘油的抗體保存于-80℃，該溫度已經(jīng)超過了甘油的冰點(diǎn)；
2、 加蛋白保護(hù)劑：蛋白在高濃度時(shí)不易降解，正如有些抗體會(huì)加入BSA作為穩(wěn)定劑的原因，同時(shí)加入蛋白也可減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標(biāo)記的話，則不能加入蛋白穩(wěn)定劑，因?yàn)檫@些穩(wěn)定劑會(huì)和抗體一起競爭結(jié)合標(biāo)記物。
3、加入疊氮化鈉：為了防止微生物污染，經(jīng)常選擇加入疊氮化鈉到抗體中（終濃度 0.02% (w/v)）。但在下述情況中不能使用疊氮化鈉：
抗體用于染色或處理活細(xì)胞，用于體內(nèi)研究。疊氮化鈉在抵抗微生物的同時(shí)，對(duì)其它大部分有機(jī)物也是有毒的，因?yàn)樗钄嗔司�粒體的 細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng)cytochrome electron transportsystem。
要偶聯(lián)帶有氨基的抗體。疊氮化鈉會(huì)干擾任何含有氨基的偶聯(lián)，因此在進(jìn)行偶聯(lián)之前，應(yīng)將疊氮化鈉去除。偶聯(lián)后的抗體可以加入疊氮化鈉保存，但是濃度只能是0.01％。對(duì)于需要偶聯(lián)的抗體，硫柳汞 (merthiolate)可以替代疊氮化鈉作為保護(hù)劑。
此外，如果需要去除疊氮化鈉，可以通過凝膠電泳或過濾的方式（IgG 的分子量是 150kDa，疊氮化鈉的分子量只有65Da），使用cut off 14kDa的濾膜即可將疊氮化鈉從抗體中去除。
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