本文涉及應用技術：均相時間分辨熒光（HTRF&TR-FRET）。來看研究人員是如何利用HTRF技術助推心血管疾病的研究的吧。
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一氧化氮信號通路研究
一氧化氮（NO）是自分泌和旁分泌的信號通路分子，可以擴散進入生物膜。發揮作用時間很短，促進血管動態平衡。能夠抑制平滑肌收縮生長，阻止血小板凝聚以及防止白細胞-內皮細胞粘附。另外它還參與免疫防御系統，神經傳遞，血管生成等過程。研究表明，這種配體/受體長期低表達可能是高血壓、心力衰竭、心肌梗死、中風和死亡的發病的關鍵。因此，NO-sGC信號通路廣泛用于可恢復功能缺陷的治療藥物的研究。

2011年，Ramanathan等人在研究新發現的sCG抑制劑血栓反應蛋白-1(TH-1)，這是一種與多種膜受體(包括CD47)結合的多結構域蛋白。他們對活細胞和細胞裂解物進行了HTRF cGMP檢測，以評估在NO存在的情況下，各種情況對sGC活性的影響。結果表明，TH-1的E3CaG1片段與CD47結合時，抑制NO-sGC信號(圖2.A)。在E3CaG1存在下，加入CD47抗體，NO-sGC信號增強(圖2.B)。此外，E3CaG1與CD47結合引起細胞內鈣離子增加，cGMP減少(圖2.C)。
 

藥物的發現
2018年，Tobin等人研究IW-1973，一種新開發的sGC激動劑。作者通過HTRF技術檢測cGMP、總VASP和磷酸化VASP（Ser 239）來檢測其功能。結果表明，在30mM NO條件下，IW-1973激活sGC，EC50為267 nM。對cGMP的影響很低，對VASP磷酸化的影響達到峰值為78%。

藥物的高通量篩選
高甘油三酯水平與心血管疾病的患病風險相關。載脂蛋白CIII(ApoC-III)（在脂解和脂質合成中的作用）是它們的關鍵調節因子和治療應用的合理靶點之一。

2017年，Jun Lee和Mahankali等人旨在識別可能顯示出治療效果的ApoC-III的小分子抑制劑。使用HTRF ApoC-III檢測，他們篩選了超過95萬種化合物，并確定了抑制率高于50%的化合物，并對其進行了進一步的研究（圖4）。

結果顯示，反式維甲酸(atRA)可能是有效的抑制劑。被認為是與兩個受體家族相關(RARs和RXRs)，作者進一步使用HTRF載脂蛋白分析來確定atRA對ApoC-III的影響僅是通過RARs介導的。

總的來說，對ApoC-III分泌的各種RAR受體激動劑進行了研究。AM580最有效的減少ApoC-III分泌，有效改善高脂飲食小鼠的體重、肝臟狀況、心臟狀況和甘油三酯水平。這些研究表明，一種RARα特異性激動劑可能為降脂和降低CVD風險提供了一種新的策略。

表征配體的功能研究--新開發抗β-Arestin受體配體
β-Arestin是一種多功能信號蛋白，主要作用于GPCR脫敏，通過β-1-腎上腺素能受體激活EGFR/ERK信號，已被認為在心力衰竭模型中具有心臟保護作用。

為了更好地和直接觀察表達β-Arestin受體（βAR）的細胞和組織的生理和病理功能，Mitronova等人（2017）開發此類受體的熒光配體。用熒光基團標記已知的βAR拮抗劑卡唑洛爾和激動劑BI-167107，米特羅諾娃的團隊進行了配體-受體結合實驗和生物活性的分析。HTRF Tag-lite β1AR或 β2AR分析來確定解離常數（Kd），通過檢測cAMP分析評估新配體的效力。

結語：該文章提供了HTRF技術在心血管相關研究的中的相關思路并得到驗證的數據。為心血管疾病研究的道路“開辟捷徑”，主要研究思路包括：
①候選藥物的藥理特性分析；
②對潛在分子的化合物進行高通量篩選：HTRF高通量篩選平臺；
③受體-配體相互作用的研究：HTRF Tag-lite（基于細胞膜受體-配體）；
④深入研究信號通路：磷酸化蛋白和總蛋白檢測，生物標志物檢測。