磁珠預處理和實驗方法

瀏覽次數：3055　發布日期：2021-8-7　來源：MedChemExpress

磁珠的優勢
◎ 蛋白荷載量高
◎ 特異性強、非特異性結合性低
◎ 樣品損失小
◎ 操作方便

如何操作
■ 磁珠預處理

將磁珠充分混懸，取 25-50 μL 磁珠，置于 1.5 mL EP 管中，加入 400 μL 結合/洗滌緩沖液，充分混懸，置于磁力架，磁性分離，棄上清；重復以上洗滌步驟 2 次。

■ 實驗方法

Step 1. 裂解細胞并準備用于免疫沉淀的樣品。

Step 2. 預處理樣品：通過將裂解樣品單獨與珠子或與無關抗體結合，以除去能與 IP 組分非特異性結合的任何蛋白質。

Step 3. 使用針對目的蛋白的抗體孵育溶液，用直接法或用間接法將抗體固定在磁珠上。繼續孵育，以形成抗體-目的蛋白復合物。

Step 4. 沉淀微珠-抗體-目的蛋白復合物，去除上清液。

A/G 磁珠的 IP 實驗

Step 5. 洗滌沉淀的復合物數次。使用磁珠時，每次洗滌置于磁性分離架上即可除去上清液。最后一次洗滌后，需要除去盡可能多的上清液。

Step 6. 使用低 pH 或 SDS 樣品上樣緩沖液從磁珠上洗脫蛋白質。

Step 7. 分析目的蛋白或蛋白復合物：SDS-PAGE，染色，質譜，Western Blotting 等。

注：具體操作細節，還需仔細閱讀對應產品說明書

■ MCE 磁珠產品

MCE 磁珠產品
HY-K0202 Protein A/G Magnetic Beads
25 μL 磁珠/ 500 μL細胞裂解液	IP/Co-IP/ChIP
HY-K0203 Protein A Magnetic Beads
25 μL 磁珠/ 500 μL細胞裂解液	IP/Co-IP/ChIP
HY-K0204 Protein G Magnetic Beads
25 μL 磁珠/ 500 μL細胞裂解液	IP/Co-IP/ChIP
HY-K0201 Anti-HA Magnetic Beads
10 μL 磁珠/ 500 μL細胞裂解液	IP/Co-IP/蛋白純化
HY-K0206 Anti-c-Myc Magnetic Beads
10 μL 磁珠/ 500 μL細胞裂解液	IP/Co-IP/蛋白純化
HY-K0207 Anti-Flag Magnetic Beads
10 μL 磁珠/ 500 μL細胞裂解液	IP/Co-IP/蛋白純化
HY-K0208 Streptavidin Magnetic Beads
每次結合使用 100 μL 磁珠	IP/Co-IP/ChIP/細胞分選/蛋白純化/核酸雜交