重組蛋白常見的融合標簽整理匯總
Q：什么是融合標簽？
A：融合標簽是指利用 DNA 體外重組技術，在目的蛋白 N 端或 C 端進行融合表達的特定蛋白、多肽或寡肽標簽。
Q：融合標簽有什么作用？
A：重組蛋白通過融合標簽與包被在固相基質上的特異配基結合，使重組蛋白定向固定并得以純化，大大簡化了重組蛋白的檢測，同時既能保留天然蛋白的大部分結構，又能實現增加溶解度，防降解，促進分泌，便于純化等功能。
Q：融合標簽的分子量和功能有關嗎？
A：蛋白融合標簽的分子量越大，對蛋白質本身的功能影響越大，所以大分子融合標簽一般只用于檢測或蛋白純化等。常見的小分子量的融合標簽，因其具有很多商品化的標簽抗體，可以節(jié)省使用者制備目的蛋白的單克隆抗體的時間與成本。
Q：是否所有的融合標簽都需要切除？
A：融合標簽較小，免疫原性也很弱，一般不需要切除，對蛋白質的后續(xù)應用和研究不會產生影響。但是有些大標簽是需要切除的，例如：Dsb 蛋白、FkpA 蛋白、GST 蛋白、SUMO 標簽等。
為了便于將重組蛋白的融合標簽去除，在設計構建載體時需要在標簽蛋白和目的蛋白之間加上蛋白酶識別位點，常用的蛋白酶位點有：HRV 3C 蛋白酶切位點、TEV 蛋白酶切位點、腸激酶切位點、SUMO 蛋白酶切位點等。
Q：融合標簽加在 N 端或 C 端，有什么區(qū)別？
A：蛋白融合標簽對于 N 端或 C 端的選擇性對重組蛋白的結構與特性會造成一定的影響。例如，對于較難表達或較容易降解的蛋白，可將融合標簽選擇在 5’ 端，可以提高重組蛋白的穩(wěn)定性，也可減小對重組蛋白的免疫原性。但是重組蛋白為分泌蛋白，在其分泌到高爾基體的過程中，處于 5’ 端的融合標簽會隨著 5’ 端信號肽的切除而切除，從而失去作用。在目的蛋白結構未知的情況下，可以分別于兩端構建標記的表達克隆，以確定哪個更有效。
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