RACE技術(shù)定義
RACE技術(shù)即cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)（rapid amplification of cDNA ends），基于PCR從低豐度的轉(zhuǎn)錄本中快速擴(kuò)增cDNA的5'和3'末端的有效方法。通常用于已知中間片段序列，對(duì)未知兩端序列進(jìn)行擴(kuò)增的一項(xiàng)技術(shù)。

02

RACE和普通PCR在重組抗體中的應(yīng)用比較

普通PCR和RACE應(yīng)用比較

普通PCR在抗體基因擴(kuò)增中的應(yīng)用

RACE法在抗體基因擴(kuò)增中的應(yīng)用

制備基因工程抗體時(shí)需要進(jìn)行鼠雜交瘤擴(kuò)增，通常利用5’RACE技術(shù)。5’RACE技術(shù)的優(yōu)化將極大的提高基因工程抗體制備的成功率。華安生物進(jìn)行5’RACE時(shí)，常使用加尾法，根據(jù)接頭引物和自己設(shè)計(jì)特異引物，設(shè)計(jì)巢式PCR來(lái)進(jìn)行二次擴(kuò)增。

 

5’RACE技術(shù)原理

RACE擴(kuò)增鼠雜交瘤-引物設(shè)計(jì)

1.正向引物：加接頭序列即：

2.反向引物：選擇 mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3 相似性較高的CH1區(qū)域或其它保守區(qū)域設(shè)計(jì)下游引物。
 

Tips:

在逆轉(zhuǎn)錄、TdT加尾、PCR擴(kuò)增這三個(gè)連續(xù)的酶促反應(yīng)過(guò)程中，任何一步的失敗都會(huì)導(dǎo)致前功盡棄。


目前華安生物也采用RACE技術(shù)開(kāi)發(fā)生產(chǎn)一系列重組兔單克隆抗體，感興趣的同學(xué)可以來(lái)看看哦~