一入十一月，除了秋高氣爽的好天氣外，我想到的最多的便是“雙十一”了。在這個特殊的日子里，各大試劑廠商都會有一些降價促銷的活動。作為檢測細胞免疫狀態很重要的指標，多重細胞因子檢測現在越來越受到很多老師的歡迎。為了讓各位老師能夠更好地完成這個實驗，我們在這里獻上一篇使用Cytek全光譜流式細胞儀檢測多重細胞因子方法的福利。不久前，Cytek公司與Biolegend的國內總代理達科為生物技術有限公司一起在上海市第一人民醫院舉辦了流式培訓班。 這次培訓班共有約60名學員，培訓的內容包括理論指導，樣本制備，上機操作以及數據分析。理論培訓中，Cytek公司的科技總監沈紅梅博士與達科為公司的技術支持介紹了全光譜流式的原理、多色應用、多重細胞因子檢測的方法等內容。
   

樣本制備和上機操作部分
參加培訓的學員共分為四組，完成了16色樣本，磁珠分選及多重（8種）細胞因子檢測等樣本的制備，并在3激光Cytek Northern Lights^TM全光譜流式細胞儀上進行了收集。很多學員反饋用Cytek全光譜流式細胞儀檢測多重細胞因子，操作非常簡便。而且多色樣本中CD4+CD25+CD127^low的調節T細胞分群非常清晰，體現了光譜流式對于弱表達標志物的卓越分辨率。

 

在數據分析的部分
學員們通過使用De Novo^TM FCS Express 6軟件對多色實驗的光譜流式數據進行了分析，并完成了t-SNE分析圖的繪制。此外，還通過使用Biolegend公司的LEGENDplex^TM軟件對多重細胞因子檢測的光譜流式數據進行了分析處理，得到的標準曲線R²都高于0.999，表明具有較高的擬合度。

 

下圖為利用Cytek全光譜流式細胞儀檢測得到的多重細胞因子結果圖，使用B4/PE作為報告通道，R1/APC用于因子分類通道。Beads A門中包含5個細胞因子的群體；Beads B門中包含3個細胞因子的群體。如果想了解 檢測多重細胞因子具體步驟，請點擊下方“閱讀原文”。任何一臺具有藍色和紅色激光的Aurora或Northern Lights 全光譜流式細胞儀都能用于這個應用的檢測。

經Cytek全光譜流式細胞儀檢測的多重細胞因子的流式數據（FCS files）可以導入LEGENDplex^TM分析軟件進行分析，下圖為8個標準品的光譜流式數據經過軟件分析擬合的標準曲線，其中除了IL-10標準曲線的R²為0.999外，其余因子均為1，R²越接近于1代表標準曲線擬合度越好，樣本檢測值會越準確。這個結果也反映了光譜流式在多重細胞因子實驗中較高的準確度和靈敏度。圖中橫坐標表示濃度單位，以對數形式顯示。如果想了解具體的LEGENDplex^TM軟件分析多重細胞因子檢測結果的方法。 作為助力本次實驗完成的可靠“幫手”，3激光配置Cytek Northern LightsTM全光譜流式細胞儀，已經取得臨床注冊證！