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關(guān)于適體(Aptamer)篩選技術(shù)的相關(guān)問題介紹

瀏覽次數(shù):1413 發(fā)布日期:2024-2-22  來源:卡梅德生物
1.核酸適配體相對于抗體有何優(yōu)勢?

        適配體的篩選周期短、工作濃度低、批次差異性小、放大工藝簡單、成本低、穩(wěn)定易保存,并且可以常溫運(yùn)輸,適合于毒素和低免疫原性抗原。

2. 磁珠方法篩選適配體,磁珠是一起加入到PCR體系中嗎?對PCR的有什么影響嗎?

        一個(gè)簡單的判斷是如果加到PCR mix中,肉眼不可見磁珠的顏色,影響應(yīng)該是不大的,如果磁珠的量過多,肉眼可以看到mix中渾濁的顏色,那樣會對PCR過程產(chǎn)生抑制。

3. 一開始沒有什么引物二聚體,忽然從中間幾輪開始引物二聚體特別多,連初始文庫PCR出來,引物二聚體也是比較多,不知道錯(cuò)在哪里了?

        有可能后來出現(xiàn)了氣溶膠污染。

4. 核酸適配體有動力學(xué)特點(diǎn)嗎,比如高親和力的反應(yīng)速率比低親和力的反應(yīng)快?
       
         有這個(gè)特點(diǎn)。但是篩選中要注意的是第一輪篩選的時(shí)候,基本都是單拷貝,即使是高親和力的也不一定保留下來,因?yàn)榈陀H和力的還是更多的。所以第一輪篩選建議是盡量孵育時(shí)間長一點(diǎn),讓能結(jié)合的盡量能結(jié)合并保留下來。

5. SELEX的難點(diǎn)在哪里?
       
         主要是難在后期的鑒定。獲得文庫之后并不代表實(shí)驗(yàn)已經(jīng)成功,還需要從文庫當(dāng)中去找到真正能夠結(jié)合的單一序列。從測序、分析、挑選系列到合成,再到后面的鑒定要重復(fù)驗(yàn)證,而這個(gè)過程是非常的漫長,并且后期的成本高于前期成本。

6. 按照做抗體的方法做核酸適配體的應(yīng)用為什么行不通?

         核酸適配體結(jié)合到表面之后,它的構(gòu)象會發(fā)生改變,而這種變化就會導(dǎo)致它不能夠再像在溶液中一樣正確識別靶標(biāo)分子。核酸適配體的結(jié)構(gòu)的柔性比蛋白質(zhì)更大,更容易發(fā)生結(jié)構(gòu)的變化。

7. 核酸適配體與靶標(biāo)相互作用的作用力是什么?

        適配體可以形成多種結(jié)構(gòu)形狀,例如發(fā)夾,凸起,假結(jié)和G-四鏈體。它們可通過氫鍵,靜電相互作用,疏水作用,π-π堆積,范德華力,或這些不同的力的組合與靶分子發(fā)生相互作用。
發(fā)布者:卡梅德生物科技(天津)有限公司
聯(lián)系電話:022-82164980
E-mail:info@kmdbioscience.com

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