抗體的保存方法及注意事項
瀏覽次數:292 發布日期:2023-8-1
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抗體的保存方法一般會直接影響抗體的活性和使用效果。在保存得當的情況下,大部分抗體可以存放數月甚至數年,一般情況需嚴格按照抗體說明書來進行保存。
一、抗體保存溫度和條件
1、抗體收到后,需在12000rpm離心1~5分鐘,再打開管蓋進行分裝和保存,如果抗體體積不足50 ul,可延長離心時間至 5 分鐘,從而確保抗體全部離心下來。
2、 對于多數抗體而言,分裝成小等份并凍存于-20℃或-80℃是最佳選擇。腹水形式的產品收到后需立即凍存,因為該類產品含有大量的蛋白酶,長期在置于4℃條件會導致抗體的降解。
分裝成小等份可最大程度減少由凍融造成的損傷,以及從單個試劑瓶中多次吸取而引入的污染。
小等份只需凍融一次,如有剩余,可將剩余物保存于4℃。小等份的量取決于實驗人員在實驗中通常采用的量。小等份應不小于10μl;等份越小,儲液濃度因抗體蒸發及吸附于保存瓶表面而受到的影響越大。
抗體工作液應該當天配制當天用完,在4℃盡量不要超過1天。
3、 抗體的運輸:一般選擇4℃運輸,避免了反復凍融對抗體活性的損害;如若選擇干冰運輸,收到抗體是冰凍的,分裝時解凍,會增加一次凍融的過程,所以運輸過程中盡量避免干冰運輸。
二、特殊抗體保存條件
酶聯抗體:保存在4℃,避免凍存以降低或喪失酶活性;
偶聯抗體:需保存在棕色管或是用錫箔紙避光于4℃保存,熒光抗體對光敏感,操作時應嚴格避光;
IgG3的同型對照:保存于4℃避免凍存,反復凍融會導致抗體變性,形成多聚體;
三、抗體保存注意事項:
1、加入甘油:對于大多數抗體,可加入50%的甘油來避免反復凍融。甘油在-20℃可降低冰點,但不建議加入甘油的抗體保存于-80℃,該溫度已經超過了甘油的冰點;
2、 加蛋白保護劑:蛋白在高濃度時不易降解,正如有些抗體會加入BSA作為穩定劑的原因,同時加入蛋白也可減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標記的話,則不能加入蛋白穩定劑,因為這些穩定劑會和抗體一起競爭結合標記物。
3、加入疊氮化鈉:為了防止微生物污染,經常選擇加入疊氮化鈉到抗體中(終濃度 0.02% (w/v))。但在下述情況中不能使用疊氮化鈉:
抗體用于染色或處理活細胞,用于體內研究。疊氮化鈉在抵抗微生物的同時,對其它大部分有機物也是有毒的,因為它阻斷了線粒體的 細胞色素電子傳遞系統cytochrome electron transportsystem。
要偶聯帶有氨基的抗體。疊氮化鈉會干擾任何含有氨基的偶聯,因此在進行偶聯之前,應將疊氮化鈉去除。偶聯后的抗體可以加入疊氮化鈉保存,但是濃度只能是0.01%。對于需要偶聯的抗體,硫柳汞 (merthiolate)可以替代疊氮化鈉作為保護劑。
此外,如果需要去除疊氮化鈉,可以通過凝膠電泳或過濾的方式(IgG 的分子量是 150kDa,疊氮化鈉的分子量只有65Da),使用cut off 14kDa的濾膜即可將疊氮化鈉從抗體中去除。