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多克隆抗體的優(yōu)缺點(diǎn)、應(yīng)用以及與單克隆抗體制備流程區(qū)別

瀏覽次數(shù):3534 發(fā)布日期:2023-2-9  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

抗體,又名免疫球蛋白 (Ig),是一種由 B 細(xì)胞產(chǎn)生的大型 Y 形糖蛋白,可在免疫防御中起主要作用。抗體與病原體的特定分子(即抗原)發(fā)生特異性結(jié)合。

抗體以一個(gè)或者多個(gè) Y 形單體存在,每個(gè) Y 形單體由 4 條多肽鏈組成。每個(gè) Y 形單體包含兩條相同的重鏈(H)和兩條相同的輕鏈(L),重鏈和輕鏈的序列和長(zhǎng)度不同。Y 形單體的頂部包含可變區(qū)(V),也稱抗原結(jié)合片段(F(ab))區(qū)。該區(qū)可與給定抗原上的表位特異性緊密結(jié)合。


抗體的基本結(jié)構(gòu)包含恒定區(qū)(C)和可結(jié)晶片段(Fc)區(qū)。這一區(qū)域?qū)贵w的免疫應(yīng)答功能非常重要。此外,將熒光染料和酶經(jīng)共價(jià)鍵連接到抗體的 Fc 部位,可實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)的可視化。
Y形抗體通過(guò)彈性的鉸鏈區(qū)連接到中部。抗原結(jié)合發(fā)生在由免疫球蛋白重鏈(H)和輕鏈(L)組成的可變區(qū)(V)。抗體的基本結(jié)構(gòu)由恒定區(qū)(C)組成。根據(jù)多肽序列的微小差異,抗體的輕鏈都可分為 kappa (κ) 型或 lambda (λ) 型。重鏈結(jié)構(gòu)決定了各個(gè)抗體的總類。

 

   
哺乳動(dòng)物體內(nèi)的抗體分為 5 種同種型:IgG、IgM、IgA、IgD 和 IgE。各個(gè)同種型都有其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)。這些同種型因 Y 形結(jié)構(gòu)的數(shù)量和重鏈種類而異。它們的生物學(xué)特性、功能區(qū)域以及結(jié)合不同抗原的能力有所不同。 

     
由多種抗原決定簇刺激機(jī)體,相應(yīng)地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體,這些單克隆抗體混雜在一起就稱為多克隆抗體,機(jī)體內(nèi)所產(chǎn)生的抗體就是多克隆抗體。除了抗原決定簇的多樣性以外,同樣一種抗原決定簇,也可刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五類抗體。與單克隆抗體相比,大量多克隆抗體的生產(chǎn)相對(duì)快速且成本低廉。它們是非特異性的,因?yàn)樗鼈兡軌蜃R(shí)別任何一種抗原上的多個(gè)表位。


優(yōu)勢(shì)和局限性

1.多克隆抗體的優(yōu)勢(shì)

(1)可以幫助增加 WB 信號(hào),因?yàn)榭贵w將與多個(gè)表位結(jié)合。

(2)由于識(shí)別多個(gè)表位,多克隆抗體可以在 IP/ChIP 檢測(cè)中提供更好的結(jié)果。

(3)更能容忍抗原的微小變化,例如多態(tài)性、糖基化異質(zhì)性或輕微變性。

(4)當(dāng)抗原的性質(zhì)未知時(shí)很有用

(5)生產(chǎn)成本低,時(shí)間短

2.多克隆抗體的缺點(diǎn)

(1)更容易出現(xiàn)批次間的差異。

(2)多個(gè)表位使得檢查免疫原序列是否存在任何潛在的交叉反應(yīng)變得很重要。


應(yīng)用

一種良好的多克隆抗血清含有抗某種抗原不同表位的多種抗體。由于多克隆抗血清通常包含抗某一抗原的不同表位的抗體,包括變性—抗性的表位,所以,在深固定的樣本中也會(huì)發(fā)揮效應(yīng),在石蠟包埋組織切片的染色中,多克隆抗體常選用。根據(jù)實(shí)驗(yàn)的不同需要,多克隆抗體應(yīng)用于相應(yīng)抗原的標(biāo)記。此外,在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中,多克隆抗體被用于農(nóng)藥殘留現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè);在臨床應(yīng)用中,多克隆抗體主要用于病原物的檢測(cè)、疾病的診斷及治療,如作為蛋白類免疫抑制劑用于移植反應(yīng)和自身免疫病的治療。


單克隆抗體與多克隆抗體制備流程的比較

經(jīng)過(guò)特定抗原處理過(guò)的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞融合的方法得到雜交瘤細(xì)胞,經(jīng)HAT培養(yǎng)基篩選、ELISA檢測(cè)效價(jià)后就得到陽(yáng)性克隆株,最后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)⒓?xì)胞注入到動(dòng)物(一般為balb/c小鼠)腹腔中用腹水培養(yǎng),收集上清/腹水純化后就能得到單克隆抗體。而制備多克隆抗體就沒(méi)有單克隆抗體繁瑣,只需將抗原(純度越高越好)直接注入到動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行免疫,經(jīng)過(guò)3至4次免疫,ELISA測(cè)其效價(jià)合格后,收集血液離心得到上清,純化后即能得到多克隆抗體。
 
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