圖1. BLBS原理
 

進一步，作者將BSLB上的tSV洗脫下來，并利用NanoFCM對tSV和細胞上清獲得的EVs進行綜合表征和對比。發(fā)現(xiàn)tSV顆粒大小在82.13± 0.75nm，而EVs的粒徑為65± 25nm，明顯小于tSV的粒徑大小。用NanoFCM的Exo粒徑標準品(含68, 91, 113, 155 nm四種尺寸的SiO₂球)，對EVs和tSV的粒徑進行分群，發(fā)現(xiàn)與EVs相比，tSV中大于113nm和155nm的顆粒所占比例更高(圖2-d)；tSV中TCR、CD40L、CD81陽性的tSV顆粒粒徑顯著大于對應(yīng)的EVs陽性的顆粒(圖2-e)。
 

圖2. tSV和EVs顆粒大小亞群分類

進一步地，對tSV和EVs進行CD81和TCRαβ雙標，發(fā)現(xiàn)tSV中兩種標志物雙陽的比例高于EVs，且TCR陽性的tSV粒徑也顯著大于TCR陽性的EVs(圖3)。后續(xù)作者研究發(fā)現(xiàn)不同種類的T細胞來源的tSV內(nèi)容物具有明顯區(qū)別；tSV比EV攜帶更多的RNA結(jié)合蛋白和特有的microRNA等，感興趣的讀者可以閱讀原文進行了解。總的來說作者提出了珠狀脂質(zhì)雙分子層(BSLB)作為一種多功能的合成APCs來捕獲、表征和促進對tSV生物發(fā)生的理解，開發(fā)了一種免疫細胞間信息傳遞和交流研究的新方法。
 

圖3. tSV和EVs功能亞群分析

文章中利用NanoFCM對tSV和EVs的亞群進行精細分類，根據(jù)顆粒的大小將tSV和EVs分成四個不同大小的亞群，通過抗體標記，可對tSV和EVs 功能亞群進一步精細研究。利用NanoFCM單顆粒水平和超高分辨率的優(yōu)勢，可對tSV的不同亞群進行精細分類和研究，有望加快研究者對tSV的精細化研究進程！

參考文獻
Céspedes P F, Jainarayanan A, Fernández-Messina L, et al. T-cell trans-synaptic vesicles are distinct and carry greater effector content than constitutive extracellular vesicles[J]. Nature communications, 2022, 13(1): 3460.