單克隆抗體制備原理及步驟
瀏覽次數:344 發布日期:2022-8-2
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單克隆抗體(monoclonal antibody),簡稱單抗。與多抗相比,單抗純度高,專一性強、重復性好、且能持續性。是針專一的抗原決定簇產生的抗體,單克隆技術又名雜交瘤技術起源于1975年,由G.KÖhler和Milstein創立。主要原理是利用產生抗體的B細胞與腫瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞,生產抗體。
單克隆抗體制備的原理:
要制備單克隆抗體需先獲得能合成專一性抗體的單克隆B淋巴細胞,但這種B淋巴細胞不能在體外生長。而實驗發現骨髓瘤細胞可在體外生長繁殖,應用細胞雜交技術使骨髓瘤細胞與免疫的淋巴細胞二者合二為一,得到雜種的骨髓瘤細胞。這種雜種細胞繼承兩種親代細胞的特性,它既具有B淋巴細胞合成專一抗體的特性,也有骨髓瘤細胞能在體外培養增殖永存的特性,用這種來源于單個融合細胞培養增殖的細胞群,可制備抗一種抗原決定簇的特異單克隆抗體。
單克隆抗體制備步驟如下:
單克隆抗體制備
1、用抗原免疫小鼠;
2、從抗原免疫過的小鼠獲取脾細胞;
3、應用細胞雜交技術使骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合,得到雜交瘤細胞。這種細胞不僅能夠像B淋巴細胞一樣合成性質穩定的轉移性抗體,而且能夠像骨髓瘤細胞一樣無限復制,這樣就可以產生大量且性質專一的鼠源抗體;
4、對獲得的雜交瘤細胞進行篩選,選出能分泌高效價抗體的雜交瘤;
5、對已篩選出的單個細胞進行鑒定和克隆。
雜交瘤產生的單克隆抗體在各個領域中應用越來越廣,有很大的優點和潛力。能夠根據需要進行研發生產,可建立穩定的細胞株持續供給應用,相比于抗血清能夠減少大量的動物和費用,而且純度高,均一性好,可作為一種標準試劑。