抗體是生命科學研究、診斷和測試中常用的試劑之一。盡管它們被廣泛使用但目前還沒有標準指南來定義它們在使用前應如何進行驗證。結果是許多商業(yè)抗體沒有得到充分驗證和/或無法獲得實驗數(shù)據(jù)。 未驗證的抗體驗證導致了不可重復的結果，甚至項目被放棄，造成時間、金錢和樣品的巨大損失 。因此，迫切需要驗證抗體并為其創(chuàng)建通用標準。

什么是抗體驗證？

抗體驗證定義為以下幾點：證明特異性（抗體區(qū)分不同抗原的能力），證明在將要使用的應用中的特異性，證明親和力（抗體與表位結合的強度） ) 并最終證明可重復性。然而，雖然抗體驗證的這種定義是實用的，但其廣泛應用或標準化過程的實施仍然是一個重要的關注領域。

一些抗體銷售公司驗證了他們的產(chǎn)品，而其他公司根本不驗證它們。之所以出現(xiàn)這些差異，是因為與藥物不同，沒有機構管理可以出售的物品。但隨著市場的快速增長，質(zhì)量聲譽正在成為一些供應商商業(yè)計劃的一部分，抗體驗證現(xiàn)在被視為一種競爭優(yōu)勢。

驗證抗體的責任在于供應商本身，無論他們是制造該抗體還是簡單地分銷它。但是，雖然供應商對其銷售的試劑質(zhì)量負責，但抗體性能可能會因超出其驗證工作范圍的原因而有所不同 。例如，抗體在運輸過程中可能會發(fā)生變化，或者雖然驗證可以在具有適當控制的生物相關系統(tǒng)中完成，但最終用戶很可能會在他們自己的系統(tǒng)中使用它。因此，最終用戶也有責任驗證他們的抗體。不同的制造商已經(jīng)提出了驗證過程。

通過采取幾個小步驟，研究人員可以在運行實驗時降低風險，而無需對他們獲得的抗體進行批判性思考。
 
抗體的驗證工作流程

抗體的驗證工作流程如下：

1.識別針對感興趣蛋白質(zhì)的所有商業(yè)抗體；
2.使用 PaxDB 來識別以相對高水平表達感興趣蛋白質(zhì)的細胞系并且很容易被 CRISPR/Cas9 修改；
3.生成 KO 細胞系并通過定量免疫印跡篩選抗體；
4.使用步驟 3 中確定的特異性抗體來篩選細胞系面板；
5.根據(jù)步驟 4 中的信息選擇目標蛋白高表達的細胞系，可通過 CRISPR/Cas9 進行編輯，并具有目標目標的適當特征；
6. 使用選定的編輯線通過免疫沉淀和免疫熒光篩選特異性抗體；