實驗設(shè)計

CTCs在患者血液中的含量非常稀少，大約每10⁶~10⁷個白細胞中僅1個至幾個CTCs存在，靈敏度一直是其檢測及應(yīng)用的主要障礙。在眾多文獻報道中，人們常利用腫瘤細胞摻入試驗評價CTCs檢測方法/系統(tǒng)的靈敏度、特異性、準確性、重復(fù)性等指標。

本研究選用高表達EpCAM的結(jié)腸癌細胞株（SW620）作為摻入細胞（圖1），第一部分將不同數(shù)量（0～256個）SW620細胞摻入到1×10⁶個正常人PBMCs中，用ACEA Quanteon流式細胞儀檢測SW620細胞的實際個數(shù)，確定儀器檢測CTCs的靈敏度。

一、SW620細胞表面EpCAM表達鑒定

圖1. SW620細胞表面EpCAM表達鑒定。將新鮮血（2mL）或摻有SW620細胞的新鮮血（1000個/2mL）用Ficoll-Paque PLUS淋巴細胞分離液（GE healthcare,17-1440-02）分離PBMCs后，在以上樣本以及單獨SW620細胞中分別加入抗CD45-FITC和抗EpCAM-APC抗體孵育，設(shè)同型抗體對照，在ACEA Quanteon流式細胞儀上測試，數(shù)據(jù)采用相同設(shè)門策略分析。a. SW620細胞用IgG1 FITC和IgG2b APC同型抗體染色的結(jié)果； b-d. SW620細胞、新鮮血和摻有SW620的新鮮血用CD45-FITC和EpCAM-APC抗體染色的結(jié)果。

二、ACEA Quanteon可檢測到10⁶個正常人白細胞中的1個腫瘤細胞

圖2. 靈敏度分析。收集對數(shù)生長期的SW620細胞，標記 EpCAM-APC熒光抗體，設(shè)同型抗體對照，冰上孵育60min，用含0.5%BSA的D-PBS洗兩遍；將染色后的SW620細胞按0，2，4，8，16，32，64，128，256，512個（體積20μL）分別摻入2×10⁶個PBMCs（體積180μL）中，渦旋混勻（理論上，每100μL中含SW620細胞數(shù)：0，1，2，4，8，16，32，64，128，256），在ACEA Quanteon流式細胞儀上中速采集100μL，記錄EpCAM+細胞數(shù)量。A. 設(shè)門策略。FSC-SSC散點圖上設(shè)P1門去除碎片和雜信號，基于P1門，在散點圖上表現(xiàn)為EpCAM+的細胞即為摻入的SW620細胞；B. ACEA Quanteon流式細胞儀上的測試結(jié)果；

結(jié)論
ACEA Quanteon流式細胞儀檢測結(jié)果顯示，在不同細胞數(shù)量摻入水平，實際檢出細胞數(shù)量與理論數(shù)量之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，靈敏度為0.0001%，即可檢測到10⁶個正常人白細胞中的1個腫瘤細胞，證明ACEA Quanteon流式細胞儀在檢測CTCs方面具有高靈敏度。

參考文獻

[1] 循環(huán)腫瘤細胞檢測與臨床應(yīng)用進展。趙倩雯，司徒博，鄭 磊。南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2017, 37(10): 1423-1426

[2] 循環(huán)腫瘤細胞的研究進展。王宜文，胡孔旺。安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2017，52(12)：1897-1900

*文章來自艾森生物

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