一、IP-ELISA聯(lián)合方法原理及流程：

方法原理及流程說明：
1） 從實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的細(xì)胞中分別取400ug粗蛋白，每組用10微升抗乙酰化抗體瓊脂糖填料(ICP0388)富集（IP）。
2） 結(jié)合于瓊脂糖填料上的乙酰化蛋白每次用100uL   0.1 mol/L HCl，洗脫兩次。
3） 將洗脫液匯集在一起，用飽和碳酸鈉調(diào)節(jié)pH值至中性。
4） 然后取洗脫液100uL/孔包被于酶標(biāo)板上，重復(fù)包被兩孔，在室溫下培養(yǎng)過夜。
5） 第二天用PBSt清洗板孔2次，用0.1%BSA inPBSt封閉板孔，孵育30分鐘，再用PBSt洗滌三次。
5） 在37℃下添加HRP標(biāo)記的抗乙酰化抗體（ICP0381）用0.1%BSA in PBSt稀釋到0.25 ug/Ml,孵育30分鐘。
6） 用PBSt清洗板孔4次，每孔加100uL  TMB，培養(yǎng)30分鐘顯色。
7）每孔10 uL 2 mol/L 硫酸終止顯色。在450 nm處讀取吸光度（OD）。
8） 通過OD（處理）/OD（未處理）計(jì)算反應(yīng)性乙酰化蛋白水平。

 實(shí)例1：分析用不同濃度的TSA處理12小時(shí)的細(xì)胞中的總乙酰化蛋白水平。即先用抗AcK瓊脂糖填料（ICP038）富集IP,再以ELISA方法用HRP標(biāo)記的抗乙酰化抗體（ICP0381）做檢測(cè)不同濃度TSA處理的細(xì)胞中，快速檢測(cè)出其蛋白質(zhì)乙酰化增加達(dá)10倍。
 

實(shí)例2：分別用HDAC抑制劑TSA處理5和15小時(shí)后，對(duì)MMRU細(xì)胞樣品中的乙酰化蛋白質(zhì)進(jìn)行Western blot分析。即樣品先用抗乙酰化賴氨酸瓊脂糖填料（ICP0388）親和富集（IP），再用WB方法，加入HRP標(biāo)記的抗乙酰化抗體（ICP0381）進(jìn)行檢測(cè)，快速得到高確定性的WB結(jié)果。
三、快速檢測(cè)乙酰化蛋白所用到的相關(guān)抗體試劑