今天，小編跟您聊聊磷酸化蛋白質(zhì)組鑒定！

  蛋白質(zhì)翻譯后修飾（PTMs）幾乎參與了細胞所有正常生命活動的過程，并發(fā)揮十分重要的調(diào)控作用。蛋白修飾已經(jīng)成為國際上蛋白質(zhì)研究的一個極其重要的領域，目前研究比較成熟的有磷酸化、乙酰化、糖基化、泛素化等。

  蛋白質(zhì)磷酸化是生物體中最常見、最重要的一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾方式，它可以通過激發(fā)、調(diào)節(jié)諸多信號通路進而參與調(diào)控生物體的生長、發(fā)育、逆境應激、疾病發(fā)生等多種生命過程，一直是生物學研究的重點與熱點。根據(jù)客戶需求，金開瑞蛋白質(zhì)組平臺可提供磷酸化蛋白質(zhì)組全譜鑒定、label-free定量技術服務。

  磷酸化蛋白質(zhì)組全譜鑒定以組織、細胞等較為復雜樣本為研究對象，目的在于鑒定樣品中發(fā)生磷酸化的蛋白質(zhì)以及相應的磷酸化位點。首先對蛋白樣本進行酶解，TiO2或IMAC-Fe或IMAC-Ti富集磷酸化多肽，5600-plus質(zhì)譜檢測，利用得到的質(zhì)譜譜圖與相應數(shù)據(jù)庫搜索比較，從而得到肽段序列結(jié)果，同時通過生物信息軟件計算出磷酸化位點。對于磷酸化位點鑒定，為了增加定位修飾位點的準確性，金開瑞采用較流行的Ascore算法對發(fā)生在各位點的磷酸化修飾做進一步打分評估，從而正確辨別真實修飾位點。

技術路線：

技術特點：

●富集方法特異性高，對低PH溶液、去垢劑、鹽類、其它低分子污染物有更高的耐受性，容易與非磷酸化肽段分離；

●通量大，一次可以鑒定1000個以上磷酸化位點。

適用范圍：

●已知物種基因組序列、ESTs序列或蛋白質(zhì)序列全庫；

●無其他特別要求。

經(jīng)典案例：

題目：Identification of tyrosine-phosphorylated proteins associated with lung cancer metastasis using label-free quantitative analyses.（用Label-free定量技術鑒定肺癌轉(zhuǎn)移相關的酪氨酸磷酸化蛋白）

期刊：Journal of proteome research

主要技術：Label-free定量技術

文章摘要：酪氨酸磷酸化（P-酪氨酸）蛋白可參與肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，但目前已被報道的數(shù)量還較少。本文采用Label-free定量技術進行大規(guī)模研究酪氨酸磷酸化蛋白及其參與轉(zhuǎn)移過程的情況，共鑒定到來自276個磷酸化蛋白的335個P-Tyr位點。Label-free定量結(jié)果顯示，有36個磷酸化肽在不同酪氨酸磷酸化蛋白侵襲能力的樣品間呈現(xiàn)顯著差異。從這些肽段中提取了兩個新的位點保守序列和4個已知的特定激酶和磷酸化motif序列：EGFR, Src, JAK2和TC-PTP。通過對P-絡氨酸蛋白的蛋白相互作用分析發(fā)現(xiàn)，有11個蛋白連接在包含EGFR, c-Src, c-Myc和STAT的互作網(wǎng)絡中，該網(wǎng)絡已被確認與肺癌轉(zhuǎn)移相關。這11個蛋白中有7個之前未報道，這將提供一個更好的、全面的了解肺癌的侵襲/轉(zhuǎn)移的機制及治療方法。

圖：新發(fā)現(xiàn)的三個motif展示

Wu HY, Tseng VS et al. Identification of tyrosine-phosphorylated proteins associated with lung cancer metastasis using label-free quantitative analyses. Journal of proteome research                  

圖： 表達量發(fā)生顯著變化的酪氨酸磷酸化蛋白的網(wǎng)絡互作圖

Wu HY, Tseng VS et al. Identification of tyrosine-phosphorylated proteins associated with lung cancer metastasis using label-free quantitative analyses. Journal of proteome research              

參考文獻：Wu HY, Tseng VS, Chen LC, Chang HY, Chuang IC, Tsay YG, Liao PC: Identification of tyrosine-phosphorylated proteins associated with lung cancer metastasis using label-free quantitative analyses. Journal of proteome research 2010, 9(8): 4102-4112.