使用CytoFLEX流式細胞儀檢測囊泡/外泌體
囊泡/外泌體天然存在于體液中，并穩(wěn)定攜帶了一些重要的信號分子。囊泡/外泌體相關功能的研究已經(jīng)成為研究熱點，并有望在多種疾病的早期診斷中發(fā)揮作用。
通常，因流式細胞儀無法檢測低于 250nm 的顆粒，因而并不是檢測囊泡/外泌體微顆粒的最佳選擇。而貝克曼庫爾特公司的 CytoFLEX 流式細胞儀的問世，為流式檢測囊泡/外泌體微顆粒開辟了蹊徑。
CytoFLEX是第一臺可檢測100 nm微顆粒的流式細胞儀，并具有可同時檢測13色熒光、單個樣本存儲量大等優(yōu)秀性能，為微顆粒的檢測提供了理想的檢測平臺。
材料與方法
1.試劑
2.樣本制備
數(shù)據(jù)分析
1.建立FSC / VSSC散點圖，檢測Megamix-Plus FSC beads（100, 160, 200, 240, 300, 500, 900 nm），調整gain值。圈定100 nm - 900nm微顆粒分布區(qū)域，設定門MP Gate。同樣電壓條件下，樣本檢測管分布于MP Gate門內的即為囊泡/外泌體微顆粒；
2.建立AnnexinV-FITC/APC雙參數(shù)散點圖，通過AnnexinV表達量的多少，區(qū)分不同類型的微顆粒。并建立CD63-PE/CD41-PC7雙參數(shù)的散點圖，來檢測不同類型的囊泡/外泌體微顆粒，細胞表面抗原的不同。
*實驗數(shù)據(jù)由Kaluza軟件分析
結果
1. Megamix-Plus FSC beads 檢測結果
根據(jù)微球（100, 160, 200, 240, 300, 500, 900 nm）的分布，界定微顆粒的位置，將門命名為”MP Gate”。
2. 囊泡/外泌體微顆粒檢測結果
圖A中MP Gate顯示囊泡/外泌體微顆粒；圖B和C為相應熒光通道中，微顆粒的自發(fā)熒光；圖D中顯示兩群Annexin-V陽性細胞群標記囊泡/外泌體微顆粒。Annexin-V dim在圖中用綠色顯示，該群微顆粒表達CD41不表達或低表達CD63，且細胞較小；Annexin-V high在圖中用紅色顯示，該群微顆粒表達CD41+CD63+，且細胞相對較大。
