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免疫熒光技術(Immunofluorescence technique)又稱熒光抗體技術,根據抗原抗體反應的原理,將熒光素偶聯到已知的抗原或抗體上制成熒光探針,與血清或體液、細胞、組織中存在的相應抗體(或抗原)結合,從而對這些組織中存在的抗原或抗體進行定性、定量和(或)定位的檢測。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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用于熒光標記的抗體,應遵循以下幾個原則:特異性強、高純度、效價滿意(>1:20),最好采用單克隆抗體。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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用于抗體標記的熒光素需要具備以下條件:能夠與蛋白質形成穩定的共價鍵;標記后不影響蛋白質和自身的生物學活性;熒光效率高,標記后熒光強度下降不明顯;熒光色澤與背景色澤對比鮮明;標記方法簡單、快速;安全無毒。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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熒光抗體的保存原則是:防止抗體失活;保持熒光素不脫落和不淬滅。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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免疫熒光技術的染色方法分為直接法和間接法。直接法的原理是將熒光標記的抗原/抗體直接與相應抗體/抗原反應,多用于流式細胞儀分析。直接法的優點是操作簡便、特異性高,非特異性熒光染料少。但直接法的靈敏度偏低,而且每檢查一種抗原就需要制備一種熒光抗體,若檢測多種抗原需制備多種相應的熒光標記抗體。間接法的原理是先用未標記的抗體進行標記,使抗原抗體充分結合,然后洗滌,除去未結合的抗體;然后加上熒光標記的二抗,使之與已經結合在抗原上的一抗結合。 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||
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閱讀原文:http://www.liankebio.com/TechServiceShow/articleID/2015040021.html