免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescence）是一項基于免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微成像檢測的強大方法，下面對免疫熒光進行詳細(xì)介紹。

01 定義與原理

免疫熒光技術(shù)，又稱熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。其基本原理是利用抗原抗體反應(yīng)的高度特異性，將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體（或抗原）上，與其相應(yīng)的抗原（或抗體）結(jié)合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。

02 直接免疫熒光和間接免疫熒光 

直接免疫熒光：直接免疫熒光的實驗步驟相對簡單。它只需要將特異熒光抗體直接滴加于待檢的標(biāo)本上，然后熒光標(biāo)記的抗體與抗原發(fā)生特異結(jié)合，使之呈現(xiàn)熒光。這種方法只需要一個標(biāo)記步驟，因此實驗方案較短。

間接免疫熒光：間接免疫熒光則相對復(fù)雜。它需要使用兩個抗體，即一抗和熒光素標(biāo)記的二抗。首先，將未標(biāo)記的一抗加到已知抗原標(biāo)本上，使抗原抗體充分結(jié)合。然后洗滌去除未結(jié)合的抗體，再加入熒光標(biāo)記的二抗，二抗與一抗結(jié)合，從而間接地標(biāo)記抗原。這種方法需要額外的操作步驟，特別是在多色實驗中，需要選擇適當(dāng)?shù)亩�抗，每個二抗需要靶向不同的物種并偶聯(lián)至不同染料。

圖片改編自：徠卡官網(wǎng)

03 特點

· 特異性強：由于抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性，因此免疫熒光技術(shù)能夠準(zhǔn)確識別目標(biāo)抗原或抗體。
· 敏感性高：熒光色素的標(biāo)記使得抗原抗體復(fù)合物在熒光顯微鏡下易于觀察，從而提高了檢測的敏感性。
· 速度快：免疫熒光技術(shù)操作簡便，能夠在短時間內(nèi)完成檢測。

徠卡激光共聚焦拍攝免疫熒光處理的肝類器官

04 應(yīng)用范圍

直接免疫熒光：常用于細(xì)菌、病毒等微生物的快速檢查和腎炎活檢、皮膚活檢的免疫病理檢查。

間接免疫熒光：間接免疫熒光法在基礎(chǔ)生物學(xué)、臨床免疫學(xué)診斷、生物醫(yī)藥研究、遺傳學(xué)等多個領(lǐng)域都有著廣泛的應(yīng)用，其中在基礎(chǔ)生物學(xué)領(lǐng)域可以通過細(xì)胞爬片、組織切片、石蠟切片等精確地在細(xì)胞或組織中定位和檢測特定的蛋白質(zhì)。

SBC搭建的徠卡stellaris 5是超高分辨率的點掃描共聚焦顯微鏡，具有22mm均勻大視場，掃描最大分辨率8K，搭載Power HyD檢測器系列能提供更高的光子檢測效率。同時還配備了拼圖模塊，Z軸序列拍攝模塊，自動聚焦模塊，共定位分析模塊，光譜拆分模塊，高階3D處理模塊等可以滿足不同的科研需求。 

徠卡stellaris 5超高分辨率激光共聚焦顯微鏡平臺

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