培養基的保存與使用

液體培養基的保存是冷藏好？還是冷凍好？

要冷藏！因為液體培養基經冷凍后再經溶化時，其溶液的PH值會發生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會受到影響對細胞生長不利。故液體培養基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養基在冷藏條件下可存放6個月至一年。

注意：

• 液體培養基應于4℃冰箱避光保存，實驗前需放入37℃預熱再用。
• 未加血清液體培養基存放期為12個月，加入血清的液體培養及存放期為6個月。

（液體培養基中的L-谷氨酰胺會隨著儲存時間的延長而慢慢分解。如果細胞生長不良，可以再添加適量L-谷氨酰胺。）

液體培養基偶然被凍，可否繼續使用？ 

如果細胞培養基偶然被凍，您應該融化培養基并觀察是否有沉淀產生。如果沒有沉淀產生，培養基可以正常使用，如果出現沉淀，只能丟棄這些培養基。

培養基及其它添加物和試劑可反復凍融嗎？ 

大部分添加物和試劑最多可以凍融3次，如果次數更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會影響它的性能。

培養基在使用過程中應注意的問題： 
（1）培養基在使用前需37℃預熱或在室溫平衡后再使用。 
（2）細胞培養過程中，吸取過培養液的吸管不能再用火焰燒灼，防止殘留在吸管內的培養基焦化，將有害物質帶入培養液中。 
（3）盡量縮短各種液體、細胞的暴露時間。 
（4）避免液體間、細胞間的交叉污染。 
（5）配制完全培養基時，配制的量最好在2周內用完為好。

關于培養基中的添加物

為什么有的培養基中要去掉酚紅？

酚紅在培養基中被用來作為pH值的指示劑，桃紅色表示中性pH，黃色代表酸性pH，紫色表示堿性pH。但是酚紅具有一定的固醇類激素樣的作用，如雌激素樣作用，尤其對于所培養的哺乳類動物細胞，可能發生的固醇類反應不可忽視。為了避免酚紅干擾檢測結果，許多研究人員視情況不同來選擇是否使用含酚紅的培養基。

在培養基中加入HEPES有何好處？

培養基中最常用的緩沖體系是碳酸氫鹽，它可提供營養，但卻在生理pH條件下會降低緩沖能力。而HEPES是一種很強的緩沖劑，能使細胞培養基在pH7.2-7.6條件下緩沖能力增強。

培養基是否要添加L-glutamine（L-谷氨酰胺）？

對于所有的哺乳類動物細胞而言，L-glutamine（L-谷氨酰胺）是一種必須氨基酸。現在，所有固體包裝的培養基都含有L-glutamine，因為L-glutamine在溶液中不穩定，易分解，商品化的液體培養基不含L-glutamine，如果原來培養基中不含L-glutamine 或者L-glutamine 已經降解，應在使用培養基之前加入適量的L-glutamine。各種培養基的L-glutamine的濃度是不同的，比如M199含有0.68mM的L-glutamine，DMEM含有4 mM的L-glutamine。

液體培養基中谷氨酰胺的作用及使用方法。
幾乎所有的細胞對谷氨酰胺有較高的要求，細胞需要谷氨酰胺合成蛋白質，在缺少谷氨酰胺時，細胞生長不良而死亡。所以，各種培養液中都含有較大量的谷氨酰胺。

谷氨酰胺在溶液中很不穩定，應置-20 ◦C冰凍保存，用前加入培養基中。加有谷氨酰胺的液體培養基4 ◦C 冰箱儲存兩周以上時，應重新加入原來量的谷氨酰胺。

培養基中丙酮酸鈉的作用是什么？

細胞通常以葡萄糖作為碳源，丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源。如果沒有足夠的葡萄糖供應，細胞就會選擇丙酮酸鈉作為代謝底物。丙酮酸是糖酵解途徑中一個中間產物，也是EM（Embden Myerhoff）途徑的第一步，所以培養基中添加的丙酮酸既可以作為能量的來源也可以為細胞的代謝提供碳骨架。

對于某些特殊的細胞，丙酮酸對維持細胞的生存是必需的，丙酮酸對于某些細胞的繁殖和低血清濃度的增殖也是必不可少。

培養基中的丙酮酸鈉濃度一般是0.1 mM，商品化的丙酮酸鈉一般是10 mM (100X)的溶液。