根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),生活飲用水中不應(yīng)含有病原微生物； 生活飲用水應(yīng)對(duì)微生物的幾個(gè)指標(biāo)總大腸菌群、大腸埃希氏菌、菌落總數(shù)。其中菌落總數(shù)不能超過100個(gè)ＣＦＵ／ｍＬ），總大腸菌群限值為不應(yīng)檢出。本方案利用濾膜法過濾法，將濾膜放置在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基培養(yǎng)后計(jì)數(shù)，達(dá)到檢測(cè)出生活飲用水中的總大腸菌群數(shù)量。
方案詳情：

• 實(shí)驗(yàn)原理

先通過手動(dòng)或自動(dòng)培養(yǎng)皿分裝儀分裝好選擇性培養(yǎng)基，用孔徑為0.45μm的微孔濾膜過濾水樣后,將濾膜貼在選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)后,能形成典型菌落，通過自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)總大腸菌群數(shù)量的方法。
二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、培養(yǎng)基和試劑
① 品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基
② 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液
2、儀器與設(shè)備
① 過濾設(shè)備：配備濾器和抽濾裝置
② 濾膜：孔徑0.45um
③ 無齒鑷子
④ 恒溫培養(yǎng)箱
⑤自動(dòng)培養(yǎng)皿分裝儀   fluidot  FDT-MF80
⑥自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀SHASHIN KAGAKU，PSF-1100。
 
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1、濾膜滅菌:將濾膜放大燒杯中,加人純水,置于沸水浴中煮滅菌3次,每次15min。前兩次煮沸后需更換純水洗滌2-3次,以除去殘留溶劑。或使用符合要求的一次性無菌濾膜。
2、濾器滅菌。用點(diǎn)燃的酒精棉球火焰滅菌。也可用高壓蒸收滅菌器121℃高壓蒸汽滅菌20 min。
3、用鑷子夾濾膜邊緣部分、將粗糙面向上，貼放在已滅菌的濾床上，固定好濾器，將100 ml水樣(如水樣含菌數(shù)較多，,可減少過濾水樣量，或?qū)⑺畼酉♂專┳⑷霝V器中，打開濾器閥門，-5.07 x10'Pa（-0.5大氣壓）下抽濾。
4、過濾完水樣后，再抽氣約5S，關(guān)上濾器閥門，取下濾器，用鑷子夾取濾膜邊緣部分，移放在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，濾膜截留細(xì)菌面向上，濾膜應(yīng)與培養(yǎng)基完全貼緊，兩者間不應(yīng)留有氣泡，然后將平皿倒置，放入36℃±1℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h±2h。

• 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

1、挑取紫紅色且具有金屬光澤的菌落、深紅色不帶或略帶金屬光澤的菌落和淡紅中心色較深的菌落進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢。

1. 凡革蘭氏染色為陰性的無芽孢桿菌,再接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，于31℃±1℃培養(yǎng)24h±2h，有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者，則判定為總大腸菌群陽性。

 

1. 按公式(1)計(jì)算濾膜上生長(zhǎng)的總大腸菌群數(shù),以每100 ml水樣中的總大腸菌群菌落數(shù)(CFU/100ml)報(bào)告結(jié)果。

      總大腸菌群菌落數(shù)（CFU/100ml）=   ...........(1)