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重組賴氨酰內切酶應用于蛋白質科學和藥物研發

瀏覽次數:803 發布日期:2024-10-22  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

重組賴氨酰內切酶(Lys-C)來源于無色桿菌,采用大腸桿菌重組表達.重組賴氨酰內切酶(Recombinant Lysyl Endopeptidase)是一種絲氨酸蛋白酶,可高度特異性的水解賴氨酸羧基側的酰胺、酯和肽鍵,最適的反應pH為9.0-9.5,最適反應溫度為30-37℃,在4M尿素或者0.1% SDS存在的情況下仍可保持較高的酶活性.這種酶在生物技術和制藥工業中有廣泛的應用,尤其是在蛋白質的結構分析和藥物研發中。

結構與功能

賴氨酰內切酶是一種金屬蛋白酶,通常含有鋅離子作為其活性中心的一部分。它的主要功能是識別并切割蛋白質或多肽鏈中賴氨酸(Lys)殘基的C端肽鍵。這種特異性使得它在蛋白質的序列分析、蛋白質工程和蛋白質組學研究中非常有用。

生產方法

重組賴氨酰內切酶的生產通常涉及以下步驟:

1. 基因克。簭奶烊粊碓矗ㄈ缂毦、真菌或植物)中克隆編碼賴氨酰內切酶的基因。

2. 表達載體構建:將克隆的基因插入到表達載體中,通常是質粒,以便在宿主細胞中高效表達。

3. 宿主細胞選擇:選擇合適的宿主細胞(如大腸桿菌、酵母或哺乳動物細胞)進行基因表達。

4. 發酵與表達:在適當的培養條件下,使宿主細胞大量表達賴氨酰內切酶。

5. 純化:通過一系列的純化步驟(如親和層析、離子交換層析等)從宿主細胞中分離和純化重組酶。

應用

1. 蛋白質測序:賴氨酰內切酶可以用于蛋白質的N端測序,通過特異性切割賴氨酸殘基,生成一系列的肽段,便于后續的質譜分析。

2. 蛋白質工程:在蛋白質工程中,賴氨酰內切酶可以用于修飾蛋白質的結構,例如去除特定的賴氨酸殘基,以改變蛋白質的功能或穩定性。

3. 藥物研發:在藥物研發過程中,賴氨酰內切酶可以用于分析和修飾藥物靶點蛋白,幫助理解藥物的作用機制。

注意事項

- 酶的穩定性:重組賴氨酰內切酶的穩定性可能受多種因素影響,如pH值、溫度和金屬離子濃度。在使用過程中需要優化這些條件以保持酶的活性。

- 特異性:雖然賴氨酰內切酶對賴氨酸殘基有特異性,但在復雜的蛋白質混合物中,可能需要結合其他分離技術(如色譜)以提高分析的準確性。

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發布者:上海惠誠生物科技
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