DNA磁珠純化技術的原理與優勢、操作細節
瀏覽次數:178 發布日期:2024-7-25
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DNA磁珠純化技術的原理與優勢、操作細節
—吉恩特生物實驗室
1. 技術原理
DNA磁珠純化技術的核心原理是利用磁珠表面的官能團(硅羥基、羧基、氨基等等)與DNA分子之間的靜電相互作用實現DNA的特異性吸附和洗脫。在特定條件下(如一定濃度的醇類,如:PEG600~2000等和鹽離子環境中),DNA分子的構象會發生變化并暴露出大量帶負電荷的磷酸基團,這些磷酸基團與磁珠表面的官能團(如羧基)在鹽離子的作用下形成“電橋”,從而實現DNA的特異性吸附。隨后通過改變溶液環境(如降低鹽離子濃度、加入洗脫緩沖液等)可以解除DNA與磁珠之間的相互作用并將DNA洗脫下來。原理總結:在高鹽、低pH值情況下吸附DNA;低鹽、高pH值情況下釋放DNA。
2. 技術優勢
DNA磁珠純化技術相比傳統核酸純化方法具有顯著優勢:
操作簡便:步驟簡單明了,易于掌握和操作,如手工操作,有磁力架或者磁鐵就可以完成。
自動化程度高:手工實驗流程可以模擬到自動化儀器上,程序設置簡單,減少人工操作誤差。
高通量:大量樣品能夠同時處理,如今市面上16通道~96通道儀器隨處可見,提高實驗效率。
純度高:能夠有效去除雜質和污染物,提高核酸純度。
3. 操作細節
樣本處理:非液體樣本處理要到位,該研磨需研磨。
磁珠轉移:轉移要干凈,不要有明顯的磁珠殘留,會影響DNA得率。
加熱洗脫:磁珠吸附DNA后,粘附團聚實屬正常現象,可適當加溫50℃洗脫.