測定意義：

在酸性溶液中，考馬斯亮藍G-250與蛋白質結合形成藍色復合物；該復合物在620nm處有最大吸收峰， 其顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比。該方法靈敏度高，適合微量蛋白質分析。
 

NAD+和 NADH 的提取操作步驟：

1、血清（漿）中 NAD+和 NADH 的提取：

NAD+的提�。喝� 0.1mL 血清（漿），加入 0.5mL 酸性提取液，煮沸 5min (蓋緊，以防止水分 散失)，冰浴冷卻后，10000g 4℃離心 10min；取上清 200uL，加入等體積堿性提取液；混勻，10000g 4℃離心 10min，取上清，冰上保存待測。

NADH 的提�。喝� 0.1mL 血清（漿），加入 0.5mL 堿性提取液，煮沸 5min(蓋緊，以防止水分 散失)，冰浴冷卻后，10000g 4℃離心 10min，取上清 200uL，加入等體積酸性提取液；混勻，10000g 4℃離心 10min，取上清,冰上保存待測。

2、組織中 NAD+和 NADH 的提取：

NAD+的提�。悍Q取約 0.1g 組織，加入 0.5mL 酸性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(蓋緊，以防 止水分散失)，冰浴冷卻后，10000g 4℃離心 10min，取上清 200uL，加入等體積堿性提取液混勻， 10000g 4℃離心 10min，取上清,冰上保存待測。

NADH 的提�。悍Q取約 0.1g 組織，加入 0.5mL 堿性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(蓋緊，以防 止水分散失)，冰浴冷卻后，10000g 4℃離心 10min，取上清 200uL，加入等體積酸性提取液混勻， 10000g 4℃離心 10min，取上清,冰上保存待測。

3、細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提�。�

NAD+的提�。菏占� 500 萬細胞或細菌，加入 0.5mL 酸性提取液，超聲波破碎 1min（強度 20％ 或 200W，超聲 2s，停 1s），煮沸 5min(蓋緊，以防止水分散失)，冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min，取上清液 200uL 另一新的離心管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4℃ 離心 10min，取上清,冰上保存待測。

NADH 的提取：收集 500 萬細胞或細菌，加入 0.5mL 堿性提取液，超聲波破碎 1min（強度 20％ 或 200W，超聲 2s，停 1s），煮沸 5min(蓋緊，以防止水分散失)，冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min，取上清液 200uL 另一新的離心管中，加入等體積的酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4℃ 離心 10min，取上清,冰上保存待測。