細胞凋亡檢測常用的顯微鏡及形態(tài)學(xué)檢測方法
細胞凋亡檢測常用的儀器設(shè)備主要有 光學(xué)顯微鏡、倒置顯微鏡、熒光顯微鏡、共聚焦激光掃描顯微鏡、透射電子顯微鏡等進行觀察。
一、光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡
① 未染色細胞：凋亡細胞的體積變小、變形，細胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，細胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。
② 染色細胞：常用吉姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化，核膜裂解、染色質(zhì)分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。
二、熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡
一般以細胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變?yōu)橹笜藖碓u判細胞凋亡的進展情況。常用的 DNA 特異性染料有：HO 33342 (Hoechst 33342)，HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三種種染料與DNA 的結(jié)合是非嵌入式的，主要結(jié)合在 DNA 的 A-T 堿基區(qū)。紫外光激發(fā)時發(fā)射明亮的藍色熒光。Hoechst 是與 DNA 特異結(jié)合的活性染料，儲存液用蒸餾水配成1 mg/ml 的濃度，使用時用 PBS 稀釋，終濃度為10 μg/ml。DAPI 為半通透性，用于常規(guī)固定細胞的染色。儲存液用蒸餾水配成1 mg/ml 的濃度，使用終濃度一般為10 μg/ml。
結(jié)果評判：細胞凋亡過程中細胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期：Ⅰ期的細胞核呈波紋狀（rippled）或呈折縫樣（creased），部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài)；Ⅱa 期細胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化；Ⅱb 期的細胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體(圖1)。
三、透射電子顯微鏡觀察
結(jié)果評判：凋亡細胞體積變小，細胞質(zhì)濃縮。凋亡Ⅰ期（pro-apoptosis nuclei）的細胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞，出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象（cavitations）的空泡結(jié)構(gòu)(圖2)；Ⅱa 期細胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化；細胞凋亡的晚期，細胞核裂解為碎塊，產(chǎn)生凋亡小體。
蘇州阿爾法生物提供的光學(xué)顯微鏡、倒置顯微鏡、生物顯微鏡、熒光顯微鏡、共聚焦激光掃描顯微鏡、透射電子顯微鏡等廣泛應(yīng)用于細胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫生物學(xué)實驗。
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