當前嵌合抗原受體T細胞免疫療法（Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy, CAR-T）已經在血液腫瘤治療領域取得了矚目的效果。但與小分子或抗體藥物不同的是，CAR-T是一種“活的”細胞類藥物，有諸多因素可以影響療效，其中CAR分子結構便是一關鍵因素。

CAR分子結構包含識別腫瘤抗原的抗體單鏈可變區、鉸鏈區，以及胞內的共刺激結構域、信號傳導域，其設計的合理性會影響CAR-T細胞的殺傷效應、體內持久性、以及安全性等。因此，針對不同的腫瘤治療靶點，我們需要設計合理有效的CAR分子，并包裝成CAR慢病毒，用于后續CAR-T細胞的構建。
 

CAR分子設計太難？
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CD19抗原慢病毒包裝及滴度檢測

將表達CD19抗原的慢病毒純化液進行梯度稀釋（0.01、0.1、1、10μl），分別加入到相同數量的293T細胞中，72小時后流式檢測293T細胞陽性率，進而按如下公式計算慢病毒的轉導滴度：

A：表示0.1μl組陽性細胞占比

B：表示0.01μl組陽性細胞占比

N：加入病毒時候細胞數量

V：表示A組中病毒的加入體積
 

圖1 CD19抗原慢病毒滴度檢測結果

（數據來源：賽業生物）

如圖所示，CD19抗原陽性細胞的數量隨轉染病毒梯度的增加而逐漸升高，表明該慢病毒有良好的感染活性，并按上述公式計算病毒滴度為：1.4×10⁸ Tu/ml。

CD19-293T穩轉細胞株構建

我們將成功制備的上述CD19病毒轉染293T細胞，經過多輪篩選獲得陽性率幾乎為100%的CD19-293T細胞，其陽性率檢測結果如下圖所示。

圖2 CD19-293T穩轉細胞株陽性率檢測結果

（數據來源：賽業生物）

CD19-CAR慢病毒包裝及滴度檢測

我們將針對CD19靶點設計的二代經典CAR分子構建到慢病毒載體中，并包裝得到CD19-CAR慢病毒，采用上述方法檢測病毒滴度，經計算后得到病毒滴度為：4.33×10⁸ Tu/ml。

圖3 CD19 CAR分子結構，其中VH和VL序列來源于CD19抗體FMC63克隆
 

圖4 CD19 CAR慢病毒滴度檢測結果
（數據來源：賽業生物）
 

其他慢病毒感染

圖5 其他細胞慢病毒感染效果圖

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