Echo Revolve顯微鏡在香棒蟲草生藥學與數字化表征研究的應用
前言
香棒蟲草主產于山西省，主要分布在山西南部中條山一帶，民間常用它代替冬蟲夏草作為滋補品使用。除了山西，香棒蟲草在我國甘肅、云南、青海、廣東、海南及國外斯里蘭卡和歐洲也有分布。雖山西民間將香棒蟲草作為冬蟲夏草的替代品，但其未收載進藥材標準，且藥用歷史較短。《中國真菌志》雖明確了其真菌的來源，但對其宿主來源和形態均未有詳細的描述。鑒于此，本研究應用性狀及顯微鑒定法，對香棒蟲草的蟲體形態、頭部特征、子座長出方式、環紋及分節、復毛區剛毛等特征進行詳細研究和科學描述，同時與冬蟲夏草進行比較，有助于香棒蟲草資源的開發及其質量標準的制定，同時可以為冬蟲夏草的市場監管和監督檢驗提供參考依據。
本研究應用數碼相機、體式顯微鏡與其數碼成像系統對香棒蟲草子座和蟲體的外觀性狀特征進行觀察和表征；通過冷凍切片和熒光染色，體式熒光顯微鏡與其數碼成像系統、熒光顯微鏡工作站，對香棒蟲草子座和蟲體部位的橫切面顯微特征進行觀察和表征；應用掃描電鏡對表面及剖面的特征進行探究，并與冬蟲夏草進行了生藥學鑒別特征比較。
作者采用calcofluor white stain試液染色后，在Echo Revolve熒光顯微鏡 DAPI、FITC和RFP 3個通道下分別觀察繼發性熒光及自發性熒光，將3個通道的圖像疊加，可見蟲體內部菌絲層與表皮分別呈紫紅及黃色，動物組織與菌絲組織熒光差異明顯，見圖1。
▲ 圖1 香棒蟲草蟲體的橫切面（標尺為該圖片比例）
A-calcofluor white stain染色，3通道疊加（A1-dapi通道；A2-fitc通道；A3-rfp通道）；B－直接制片，白光下觀察；C－乳酸酚棉藍染色，白光下觀察；D－calcofluor white stain染色，熒光下觀察
本研究系統闡明了香棒蟲草頭部上顎、胸足、腹節環節、尾部剛毛及體壁針狀毛等性狀特征，子座部位不同菌絲層熒光顯微特征及蟲體部位中蟲體組織和菌絲組織熒光顯微特征差異。香棒蟲草與冬蟲夏草相比，在蟲體形態、腹足有無、氣孔形態、子座長出部位等性狀特征，以及體壁被毛、剛毛、毛片等顯微特征中存在明顯差異。通過對香棒蟲草進行生藥學研究，可為香棒蟲草資源的開發與利用提供參考；通過與冬蟲夏草的對比研究，可以避免混淆用藥，為市場監管提供科學依據，也為蟲草類藥用品種數字化表征規范的建立奠定基礎。
研究亮點：
▶ 首次采用calcoflouor white stain乳液進行熒光染色，子座與蟲體及其不同組織間區別明顯，證明該方法可對蟲草類藥材不同組織結構進行區分和表征。
▶ 闡明了香棒蟲草與冬蟲夏草的區別性特征，可以通過性狀和顯微特征來區分冬蟲夏草與香棒蟲草，以防混用及摻偽的情況，也可為粉末和制劑的檢驗提供參考，同時也為其他混淆品的鑒別研究提供依據。
文獻原文：doi:10.11669/cpj.2022.06.006
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