一 單細胞測序
單細胞測序技術(scs)是指在單個細胞水平上對其攜帶的遺傳信息進行測序，獲得某種細胞類型的基因序列等信息并進行整合分析，目前廣泛應用于新物種鑒定、病原篩查、病原進化、發育生物學、神經科學、腫瘤異質性研究以及循環腫瘤細胞等。該技術在2013年榮膺《自然-方法》年度技術。目前主要的方法為10x Genomics。
 
二 單細胞測序技術實例
1. 多重退火和成環循環擴增技術
主要研發人：哈佛大學終身教授、美國科學院院士謝曉亮教授
技術看點：降低PCR擴增偏倚，使得單細胞中93%的基因組能夠被測序。這種方法使得檢測單細胞中較小的DNA序列變異變得更容易，因此能夠發現個別細胞之間的遺傳差異。
 
2. 基于芯片實驗室技術的單細胞測序
主要研發人：斯坦福大學Stephen Quake
技術看點：基于lap on a chip開發
 
3. 基于MDA的單細胞測序
主要研發人：深圳華大基因研究院
技術看點：將多重置換擴增(MDA)和測序技術相結合
 
4. Strand-seq
主要研發人：加拿大英屬哥倫比亞大學Peter Lansdorp
技術看點：能捕捉DNA一條鏈上的信息，使得研究人員對于親本DNA模板鏈進行DNA測序，避免單細胞DNA擴增和測序時丟失定向信息。
 

• 單細胞測序收樣與樣本制備過程中的注意事項

1. 樣本類型：細胞(植物細胞需要制備成原生質體)、組織(一般需要鮮樣不可冷凍)、血液
2.最適上機檢測濃度：7x10⁵-1.2x10⁶個/ml
3.細胞活率：細胞活率大于70%
4. 細胞大小：小于40μm
5.細胞結團率：小于10%
 

• Rigel在單細胞測序中的應用

單細胞測序技術對于樣本濃度、活率、結團率有著較高的要求，特別是對于從組織中消化下來的細胞，由于細胞內含有碎片和雜質，傳統的計數方法不能有效的排除掉碎片和雜質在計數過程中帶來的干擾。

Countstar Rigel 全自動熒光細胞分析儀是一款基于圖像法檢測，配合多熒光通道，通過采集圖像中的細胞信息，進行定量分析。它將熒光顯微成像與統計學群體分析結合于一身，既能提供細胞群的統計數據，又可以獲得單個細胞的圖像，從而提供細胞形態學信息，獨特的圖像采集同時產生明場以及熒光圖像，使結果更為直觀。它結合AO(吖啶橙)和PI(碘化吡啶)兩種核酸染料(圖1)，可以排除雜質和碎片的干擾(圖2)，從而得到準確的計數結果(圖3)。

 

       
Countstar Rigel應用在單細胞測序中的文章 文章地址：https://doi.org/10.1016/j.stemcr.2020.09.008