高載量PCR片段純化試劑盒注意事項:
1.從少量樣品(1-10m9組織或102-104細胞)中提取RNA時可ロ入少許糖原以促進RNA沉定。例如加n800m
TRz이勻家品,沅定RNA前加5-10 ua Rnase-freea糖原。積原會與RNA一同沉淀出來,糖原衣度不高于
4mgml是不影響第一鏈的合成,也不影響PCR反應
2.勻后加氯仿之前欄品可以在-60至-70て保存至少ー個月。RNA沉淀可以保存于75%酒精中2-8て一星期以
或-5至-20C一年以上。
3.分層和RNA沉淀時也可使用臺式離心機,2600×9離心3060分鐘
高載量PCR片段純化試劑盒100次說明書實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65て水浴中預熱高心管中加入ME(基乙醇),(10mL加80u,50mL中加入300u)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空神即可!國體培養就更好說了)在液氮中迅速磨成精細粉末裝
入50mL離心按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顏到混勻
(3)65C水浴3-10min,期間混勻2-3次
(4)力ロ入等體積的(注意是酸動pH4.5)氯仿:異成醇(2524:1)油提(10,00opm,4C,5min)
(5)取上清等體積的氯仿異戌醇(24:1)油提(10,D00rpm,4C,5mn)
(6)カロ入14V體積10MLiC溶液,4C放置6h以上(或過
(7)10,000rpm,4C離心20min
(8)上清,用500 UI SSTE溶解沉淀
(9)酚氯仿異成醇(25241抽提兩次氯仿異成醇(24:1)油提1次(10,00rpm.4C,5min)
(10)加2體積的無水乙醇在-70て冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4C高心20mn
(12)棄上清沉淀用70%酒精漂洗一次干漫
(13)カ200u的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊開糖疑膠電泳和蒙外分光光度計掃描檢測RNA的質量在神提過程中,若蛋白質含量或其它的質還較多,可以加抽提次數)
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