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分析細胞鑒定金標準-STR(Short TandemRepeat)短串聯重復序列

瀏覽次數:7965 發布日期:2019-11-15  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
STR(Short TandemRepeat,短串聯重復序列)分析已被ICLAC、ATCC等權威機構作為金標準應用于細胞鑒定。由于目前使用錯誤細胞情況非常嚴重,越來越多的雜志要求在投稿時提供細胞STR分析數據。
經常有小伙伴問小編STR鑒定的結果要怎么看,檢測的結果代表的是什么意思?
今天來給大家梳理解析下STR鑒定結果怎么看。
STR檢測流程
首先了解下STR檢測流程,提取細胞DNA, 進行PCR擴增,擴增產物進行測序,然后進行結果分析。詳細流程如下:
▲圖1 STR檢測流程
* Dr.Cell 采用的細胞STR鑒定方法完全符合美國國家標準局(NIST)頒布的細胞鑒定標準-ANSI/ATCC ASN-0002-2011, 并且在中國CMA認證與司法鑒定許可的實驗室進行檢測。
2.STR位點基因分型結果
完整的細胞STR檢測報告請查閱(STR Report-Sample),報告上會列出受檢細胞系STR基因分型結果附表(圖2),表格中將列出所有實際檢測位點信息。第2列“Sample”為樣本檢測得到的STR位點信息, 該結果是根據實際PCR擴增后檢測到的片段長度得到的數據信息。第3列為ATCC、DSMZ等數據庫中標準細胞STR位點信息。數據庫中常規提供9個位點信息,即 Amelogenin, CSF1PO, D13S317, D16S539, D5S818, D7S820, THO1, TPOX, vWA。

▲圖2 STR基因分型結果
STR位點基因分型結果峰圖
STR位點基因分型結果峰圖
在報告中會給出受檢細胞系的STR檢測結果峰圖(圖3),該結果是根據實際PCR擴增后檢測到的片段長度和分型信息。位點信息與表1(圖2)相同。

▲圖3 STR基因分型結果峰圖
*STR: 短串聯重復序列(short tandem repeats,STR)也稱微衛星DNA(microsatellite DNA), 通常是基因組中由1~6個堿基單元組成的一段DNA重復序列,由于核心單位重復數目在個體間呈高度變異性并且數量豐富,構成了STR基因座的遺傳多態性。

* 純合子:Homozygote,指同源染色體在同一基因位點上的兩個等位基因相同。即顯示單個峰。

* 雜合子:Heterozygote,指同源染色體在同一基因位點上的兩個等位基因不相同。即顯示2個峰。

人源正常組織細胞其STR圖譜,一個基因位點僅出現一個或2個峰(更多信息請查閱短串聯重復序列 (STR, short tandem repeats) )。如發生細胞交叉污染現象,基因位點會出現多等位基因,即一個基因位點出現3或4個峰(圖6)。當然,也不能排除可能為三倍體等多倍體突變現象。

3.STR位點基因分型結果比對
根據鑒定得到的細胞STR位點信息在ATCC、DSMZ等數據庫中進行比對,進入ATCC STR數據庫頁面https://www.atcc.org/en/STR_Database.aspx )輸入檢測細胞的9個STR位點信息,與ATCC數據庫進行對比。

▲圖7 ATCC 數據庫比對
輸入信息后給出比對結果(圖8)

▲圖8 ATCC數據庫比對結果

同樣在DMSZ數據庫進行數據比對,得到匹配結果。


▲圖9 DSMZ數據庫比對結果
比對結果中"%Match"(ATCC, 圖8)及 "EV" (DSMZ, 圖9)列是受檢細胞的9個STR位點基因分型數據與數據庫中細胞的匹配度。

人源細胞STR鑒定結果判定標準:

受檢細胞STR位點的基因分型數據與其對應的標準細胞系(其原始組織或衍生細胞系)STR基因分型數據進行比對:

1)若兩者的匹配度≥80%,則判定受檢細胞系為標準細胞系或為標準細胞系的衍生細胞系。

2)若兩者的匹配度在56%-80%之間,建議結合細胞系形態、細胞系特異性標記物等輔助分析進行綜合判斷。

3)若兩者的匹配度≤56%,則判定受檢細胞樣本與其對應的標準細胞系不相關。
 

參考文獻:

1. American Type Culture Collection Standards Development Organization Workgroup,A.S.N., Cell line misidentification: the beginning of the end. Nat Rev Cancer, 2010. 10(6):p. 441-8.

2. Reid Y, Storts D, Riss T, Minor L. Authentication of Human Cell Lines by STR DNA Profiling Analysis. Assay Guidance Manual [Internet]. Bethesda (MD): Eli Lilly & Company and the National Center for Advancing Translational Sciences; 2004-.2013 May 1. (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK144066/

發布者:上海逍鵬生物科技有限公司
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