牛胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1檢測試劑盒標(biāo)本的采集及保存
1、血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2 小時或4 過夜后于1000 g 離心20 分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20 或-80 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2、血漿：可用EDTA 或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30 分鐘內(nèi)于1000 g 離心15 分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20 或-80 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、其它生物標(biāo)本：請1000 g 離心20 分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20 或-80 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：以上標(biāo)本均應(yīng)密封保存，4 保存應(yīng)小于1 周，-20 不應(yīng)超過1 個月，-80 不應(yīng)超過2 個月；標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。
操作步驟
實驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫，試劑不能直接在37 溶解；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1、加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔�？瞻卓准訕悠废♂屢�100 ，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100 ，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37 溫育2 小時。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2、棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A 工作液100 （臨用前配制），酶標(biāo)板加上覆膜，37 溫育1 小時。
3、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3 次，每次浸泡1-2 分鐘，大約400 /每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4、每孔加檢測溶液B 工作液（臨用前配制）100 ，加上覆膜，37 溫育1 小時。
5、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5 次，方法同步驟3。
6、每孔加底物溶液90 ，酶標(biāo)板加上覆膜37 避光顯色（反應(yīng)時間控制在15-30 分鐘，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4 孔梯度不明顯時，即可終止）。
7、每孔加終止溶液50 ，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
8、立即用酶標(biāo)儀在450nm 波長測量各孔的光密度（OD 值）。