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293 無血清培養基 FH-293F使用說明書

瀏覽次數:1656 發布日期:2023-5-31  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
293 無血清培養基 FH-293F使用說明書
 
產品描述:
293 無血清培養基 適用于懸浮培養條件下的 HEK293 細胞(如 293-F,293-T,Expi-293F 等) 的高密度生長和瞬時轉染表達。 培養基含有細胞生長所需的全部營養成份, 無需 添加任何添加物即可使用。(注意: 此培養基不包含抗生素以及血清)

產品特點:
瞬時轉染專用培養基, 適用于 HEK293 細胞高密度懸浮培養
無蛋白、無動物源、化學成分限定
即用型完全培養基,無需添加額外成分

基礎參數:
外觀: 澄清透明紅色液體
滲透壓: 275±15 mOSM
pH: 6.9-7.4
無菌檢測: 無菌
內毒素: <5 EU/mL
儲存條件: 2-8℃,避光
效期: 12 個月
產品用途: 僅用于科學研究,不適用于人類或動物的診斷和治療
 
產品使用方法:

細胞馴化
1)直接馴化

大部分情況下,培養于其他培養基中的細胞, 可以直接適應 FH-293F ,只要按照日常傳代方 式(稀釋)更換培養基即可。
 
2)漸進式馴化
注意:選用低代次、處于對數生長期的細胞進行馴化
① 原培養基中復蘇細胞并繼續使用該培養基傳代 2 到 3 次至細胞生長穩定,當細胞密度達到 2x10 6 cells/ml 后進行傳代,傳代細胞密度控制在 0.5-0.6×10 6 cells/mL,5-10% 血清的傳統培養基或其他無血清培養基與 FH-293F 的比例為 75:25;
②將細胞置于 37℃, 5% CO2,轉速為 110-175 rpm 的恒溫搖床中進行培養;
③當細胞密度 3-4 天后達到 3x10 6  cells/ml 且細胞活率>90%,傳代時 5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與 293培養基 的比例為 50:50,細胞密度控制在 0.5×10 6  cells/   mL。如細胞生長慢,可離心上清, 留 20%條件培養基,加入 80%的 5-10%血清的傳統培養基或其 他無血清培養基與 FH-293F 培養基 比例為 75:25 的混合培養基,繼續培養;
④重復步驟③逐步增加FH-293F 所占的比例(5-10%血清的傳統培養基或其他無血清培養基與 FH-293F 的比例為 25:75 至 10:90)直到 100%的 UP1000 無血清培養基;
⑤經過在 100%的 FH-293F 無血清培養基中的幾次傳代培養, 傳代后 3-4 天細胞的密度可以達 到 2-3×10 6    cells/mL,細胞活率大于 90%,這說明細胞已經完全適應了FH-293F 無血清培養基。 之后進行細胞的傳代培養時,細胞的起始密度可以降到 0.3×10 6 cells/mL,一般傳代 2-3 次后 再進行轉染實驗。
注意: 一般細胞馴化過程中,前三代細胞的狀態可能不是很好,但一般從第四代狀態會有改 善。

細胞傳代
1)取細胞培養樣品,人工或儀器測定細胞密度以及活率;
2)計算傳代所需的細胞用量,建議起始細胞密度為 0.2-0.4×10 6  cells/mL。建議復蘇的 細胞至少培養兩代后再用于其他用途。傳代培養體積建議為 15-20 mL(100 mL 的培養瓶)或 50-60 mL (250 mL 的培養瓶);
3)將細胞置于 37℃,5%CO2,轉速為 110-175 rpm 的恒溫搖床中進行培養,3-4 天傳代一次。
細胞轉染在 FH-293F 無血清培養基中, 采用商業化轉染試劑(例如 Gibco 293Fectin™ ExpiFectamine™ 293 Transfection Kit )  可以實現對 HEK293 細胞的高效轉染。

細胞復蘇
1) 迅速取出凍存的細胞,在 37℃水浴條件下進行解凍(可以在水中輕輕晃動,時間控制在 60s 以內);
2)輕輕地混勻細胞并將融化的細胞全部移至 15ml 無菌離心管中,逐滴加入 10ml 預熱到 37℃ 的培養基,離心換液(100g,5min) 去除全部上清,加入新鮮培養基重懸,使得細胞密度達到 0.4-0.66cells/ml;
3)將細胞置于 37℃, 5%CO2,轉速為 110-175rpm 的恒溫搖床中進行培養;
4) 2-4 天后通過人工或儀器測定細胞的密度及活率, 如果細胞密度達到 1.0*106cells/ml, 活率達到 85%以上則可進行傳代培養;
5) 如果細胞密度低于 1.0*106cells/ml,則建議對細胞進行離心(100g,5min),然后重懸 于 20-30ml 的新鮮培養基中使得細胞密度為 0.4-0.6*106cells/ml 左右,并繼續培養至細胞正常 生長則可進行傳代培養。
 
細胞凍存
1) 凍存細胞時,要選擇處于對數生長期同期細胞活率在 90%以上的HEK293cells;
2) 事先計算好凍存的細胞管數和所用的培養基的體積;
3)制備細胞凍存液:用C7001無血清凍存液凍存
4) 對細胞樣品進行計數;
5) 取樣計數, 以 100g,3-5min 的條件離心收集細胞, 然后用凍存培養基(4℃) 重懸細胞, 使得細胞密度為 5-10*106cells/ml;
6)取樣計數, 調整細胞密度;迅速分裝細胞到無菌的凍存管中, 一般 2ml 的凍存管 1-1.5ml, 貼好標簽,密封;
7) 將細胞凍存管放到置于-80℃冰箱,過夜存放后將細胞轉入液氮罐中進行保存。
發布者:上海雅吉生物科技有限公司
聯系電話:021-34661276
E-mail:58268971@qq.com

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