天然蛋白純化服務簡要介紹
瀏覽次數:1149 發布日期:2023-5-12
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1.天然蛋白純化概念
蛋白質的分離純化在生物化學研究應用中使用廣泛,是一項重要的操作技術。一個典型的真核細胞可以包含數以千計的不同蛋白質,為了研究某一個蛋白質,必須首先將該蛋白質從其他蛋白質和非蛋白質分子中純化出來。
卡梅德生物可以提供有/無標簽重組蛋白進行純化,同時也可以進行組織液,唾液,腸液,動物或者人的血清,甚至是一些動物組織等進行天然蛋白的純化分離。
2.天然蛋白純化方法
根據蛋白的特性,一般可以有以下5種純化方法,親和色譜、離子交換、分子篩、疏水色譜、HPLC,使用先進的AKTA純化系統和多種規格的預裝純化柱來純化不同來源的重組蛋白或天然蛋白。
3.不同分子天然蛋白分離純化
3.1天然大分子蛋白分離純化
根據客戶需要純化的目的蛋白的理化性質,選用適當孔徑的分子篩分離純化,再根據樣品緩沖液的PH值選用合適的陰、陽離子吸附柱以及HLPC,鑒定并收取相應洗脫峰。
3.2天然小分子蛋白分離純化
先通過分子篩多層級分離過濾除去大分子雜質,再使用大孔樹脂或反向樹脂純化小分子化合物,進一步通過HPLC和MS對小分子蛋白進行鑒定。
3.3混合未知蛋白樣品分離純化
根據客戶需分離的目的蛋白特性制定相應的方案進行分離純化,最后會通過質譜鑒定、活性鑒定等多種方案確認分離產物。
4.天然蛋白純化步驟
天然蛋白分離純化一般程序可以分為前處理、粗分離、細分離三步。
4.1前處理
分離純化某種蛋白質,首先要把蛋白質從原來的組織或細胞中以溶解的狀態釋放出來并保持原來的天然狀態,不丟失生物活性。因此,動物材料應先剔除結締組織和脂肪組織,然后根據不同的情況,選擇適當的方法,將組織和細胞破碎;植物組織和細胞由于具有纖維素、半纖維素和果膠等物質組成的細胞壁,一般需要用石英砂或玻璃粉和適當的提取液一起研磨的方法或用纖維素酶處理也能達到目的。
4.2粗分離
當蛋白質提取液(有時還雜有核酸、多糖之類)獲得后,一般使用用鹽析、等電點沉淀和有機溶劑分級分離等方法。這些方法的特點是簡便、處理量大,既能除去大量雜質,又能濃縮蛋白溶液。
4.3細分離
一般蛋白經過粗分離后,體積較小,大部分雜質蛋白已經被除去。使用疏水層析、離子交換層析、分子篩分離以及以及親和層析等方法進行進一步細分離。
4.3.1純化前檢測與純化小試
首先進行SDS-PAGE檢測蛋白情況,后通過摸索條件(緩沖液、填料、洗脫條件、鹽梯度等條件),制定出離子交換層析方案。
(1)菌液經過離心過濾,使用Akta purifier儀器,配合G25脫鹽柱進行上樣洗脫,達到純化的目的。
(2)G25脫鹽后的樣品進行SPFF(瓊脂糖凝膠)層析柱分離,樣品離心過膜后,經過平衡,上樣,洗脫步驟純化。
4.3.2蛋白純化及檢測
蛋白純化小試條件摸索完成后,可以根據小試條件放大進行大量純化,SDS-PAGE(純度驗證),紫外吸收、BCA法等進行濃度檢測。