CAR-T細胞療法是一種新興的腫瘤免疫治療方法，對比傳統的手術方法具有著自身不可替代的優勢和發展潛力。在CAR-T技術的實施中，CAR分子構建和慢病毒包裝是非常重要的。盡管近些年來，CAR分子設計和細胞功能的改進有了明顯提高，慢病毒載體的研究也有了很大進展，但距離在臨床上穩定應用還有很長的路要走。

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Q1：設計CAR分子時候對如何篩選合適的抗體scFv序列？
Answer
選擇用于構建CAR-T細胞的抗體有兩個很重要的指標：抗體的特異性和親和力。特異性決定了所構建CAR-T細胞用于治療的安全性，親和力決定了CAR-T細胞的功能。CAR-T細胞構建對所用抗體的親和力要求并不是越高越好，這一點上不同于抗體藥物，而是要有個適當的范圍，所以這一點就需要大量的實驗來篩選出親和力適當的抗體scFv序列。

Q2：CAR-T、CAR-NK以及CAR-Macrophage中使用的CAR分子結構上是否有差異？
Answer
用于構建CAR-T的CAR分子一般情況下也適合于構建CAR-NK和CAR-M。但是，目前也有不少針對于NK細胞設計的CAR分子，其主要在共刺激信號分子的使用上不同于CAR-T細胞的CAR分子，例如其使用DAP10和DAP12作為共刺激信號；對于巨噬細胞的CAR分子，其結構中不需要包含共刺激分子只含有CD3ζ信號分子，由于CD3ζ和巨噬細胞Fc受體信號分子的相似性，因此含CD3ζ信號分子的CAR-巨噬細胞也能有效的進行特異性的吞噬作用。

Q3：不引入標簽的情況下，如何實現CAR-T細胞陽性率的檢測？
Answer
目前市面上有應該標記的靶蛋白，可以通過這些靶蛋白標記CAR-T細胞結合流式法來實現CAR-T細胞陽性率的檢測；另外，如果有針對CAR蛋白scFv的抗抗體，也可以使用抗抗體來檢測。

Q4：CAR慢病毒的滴度需要達到多少才能用于CAR-T細胞構建，除滴度這一指標外，慢病毒還進行哪些指標的檢測？
Answer
一般要求活性滴度要大于1×10^8Tu/ml，除滴度這一指標外，一般會進行無菌、支原體以及內毒素等常規檢測。

Q5：我們構建的CAR-T細胞陽性率總是過低應該如何解決？
Answer
一方面可以提高慢病毒的質量，例如滴度純度等；另一方面，可以通過優化轉染條件等；再一方面可以通過優化CAR分子的結構，因為CAR分子的結構以及其穩定性都是影響CAR-T細胞陽性率的重要因素。