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「醫藥養成筆記」精選放送

——part1：「靶細胞的構建」相關問題
 

Q1：選定適應癥和靶點，卻缺乏合適的天然腫瘤細胞作為靶細胞，這種情況應該怎么選擇靶細胞？
這種情況下可以選擇構建相應的穩轉細胞株，細胞株種類的選擇上還是盡量和所研究的適應癥一致，例如研究的適應癥為肝癌，就可以選擇相應的肝癌腫瘤細胞系來進行穩轉株構建，這樣構建的穩轉株細胞也可以用于下游的體內抗腫瘤活性評價實驗。另外，如果僅做一些簡單的抗腫瘤活性評估和特異性驗證工作，也可以選擇293T和CHO-K1這一類比較常用的工具細胞，這類細胞易于被慢病毒感染，因此很容易獲得穩轉細胞，可以節省時間成本。

Q2：進行雙特異性CAR-T的相關研究，但缺少雙靶點共表達的細胞系，如何解決靶細胞的選擇問題以及驗證所構建的CAR-T細胞的特異性問題？
為解決腫瘤細胞靶點抗原表達的異質性以及CAR-T細胞治療過程中存在抗原逃逸問題，雙特異性CAR-T的研究也越來越多。在沒有適合的用于雙靶點CAR-T細胞研究的靶細胞的情況下，可以通過構建穩轉細胞株來解決，用于構建穩轉細胞株的細胞需盡可能來源于所研究的適應癥的腫瘤細胞。為研究雙特異性CAR-T細胞的功能，也可以構建表達單抗原以及雙抗原的細胞株，這樣通過體外對這些細胞株的裂解作用，可以在一定程度上評估雙特異性CAR-T細胞的特異性。

Q3：如何解決穩轉細胞株表面抗原丟失的問題：用CD20編碼慢病毒轉染293T細胞構建了一株293T-CD20穩轉細胞株，但是在培養過程中發現CD20的表達時高時低。
穩轉細胞株如果帶有真核抗性的話可以加入相應的抗生素來維持，但抗生素的加入量需要進行優化才能取得比較好的維持效果；如果不具有真核抗性，可以通過流式分選進行幾輪富集，這樣可能能夠解決穩轉細胞抗原丟失的問題；另外可以通過挑克隆的方式，篩選獲得抗原穩定表達的細胞株。

Q4：做CAR-T細胞治療腫瘤方面相關的研究時，如何選擇合適的靶細胞來證明CAR-T細胞抗腫瘤效果的特異性？
可以選擇靶抗原表達和不表達的細胞株，然后用CAR-T和對照T分別殺傷這兩種細胞，依據殺傷結果來判斷CAR-T細胞的抗腫瘤效果是否具有特異性。

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