顯微鏡是生物實驗室中必備的設備，但顯微鏡的類型和配置眾多，需求和配置如何相互對應？又該如何去選擇適合自己實驗室的顯微鏡？讓我們跟隨深藍云一起，看看顯微拍攝的設備需求吧。
 

問題1:我經(jīng)常需要觀察細胞，應該用什么樣的顯微鏡？
 

回答：細胞種類眾多，但是大多數(shù)活細胞觀察時都是未染色細胞。未染色的細胞為透明狀態(tài)，普通明場顯微鏡觀察不到，這種情況下，需要使用相差的觀察方式。相差模式將光波通過細胞折射率和厚度不同的各部細微結構產(chǎn)生的相位變化變?yōu)檎穹�差來觀察活細胞和未染色的標本。
 

問題2：我們課題組即需要對病理切片進行觀察，也需要對培養(yǎng)的細胞進行觀察，這兩種方式需要什么樣的設備？
 

回答：切片類型的樣本建議采用正置觀察方式，即物鏡位于載物臺上部，而細胞一般放置于培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿中，所需要的空間更大，更適合使用倒置觀察方式。因此對常規(guī)顯微鏡就需要一臺正置顯微鏡、一臺倒置顯微鏡。不過ECHO正倒置一體顯微鏡，既可以正置也可以倒置，一臺就可以滿足兩種需求啦。
 

問題3：既需要明場拍攝也需要熒光拍攝需要怎么選？
 

回答：

▲熒光產(chǎn)生原理圖

▲ 熒光光路示意圖
 

單色相機擁有更高的靈敏度以及光通量，而彩色相機擁有更好的對比度和色彩還原能力。熒光觀察時需要用特定波長的激發(fā)光激發(fā)材料產(chǎn)生熒光，并通過濾色片最終得到特定波長的熒光，而這種熒光一般較弱，觀察時需要高靈敏度的相機，因此配置采用單色相機。單色相機無法識別真實顏色，不適合進行明場拍攝，因為明場拍攝需要更好的對比度，彩色相機才可以滿足此需求。如果想獲得最好的熒光與明場觀察效果，最佳的選擇是搭配雙相機系統(tǒng)。
 

 

這里說一下哦，ECHO正倒置一體顯微鏡突破了常規(guī)顯微鏡的設計，同時配置了雙相機系統(tǒng)，自動切換，保證無論明場還是熒光都可以獲得最佳的觀察效果，同時滿足您的多種需求。
 

問題4：市面上熒光顯微鏡的光源多種多樣，我該選擇哪種？

 

回答：大多數(shù)熒光顯微鏡的光源波長需求都在可見光范圍內(nèi)，在這個范圍內(nèi)，LED光源要明顯優(yōu)于其他光源，其在不同波長范圍可以做到光強一致，且壽命更長，無需預熱和冷卻，作為冷光源，其可以做到隨開隨用，且光毒性低，適合大多數(shù)實驗室配置。
 

問題5：可供選擇的熒光通道那么多，我該如何選擇熒光通道？

回答：對于熒光通道的選擇，需要根據(jù)用戶想要觀察的熒光波長來進行確定，如用戶后續(xù)需要DAPI染色，需要進行GFP蛋白的觀察，這些觀察都有其對應的熒光波長范圍，符合該波長范圍的熒光通道就可以選擇，如DAPI通道，F(xiàn)ITC通道。
 

問題6：物鏡該如何選擇？熒光觀察配置什么物鏡？

回答：

▲ 物鏡

物鏡的分類方式很多，這里先說一個根據(jù)色差校正進行的分類，色差校正能力由高到低分別是復消色差顯微鏡，半復消色差顯微鏡（螢石物鏡），消色差物鏡，消色差能力越強，帶來的最直觀提升是NA值越高，因此分辨率更好。半復消色差物鏡的校正范圍為400-500，是常見熒光發(fā)射光的波段，適合進行熒光觀察，因此對于熒光顯微鏡，一般配置半復消色差物鏡。

以上是一些關于如何選擇和配置顯微鏡的常見問題，后續(xù)我們還會更新一些更加深入的信息。

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