多球、共培養(yǎng)、3D腫瘤試驗
的實時活細胞分析

越來越多的證據(jù)表明，與2D單層細胞模型相比，涉及微組織和類器官的研究能提供更多的預(yù)測性和轉(zhuǎn)化觀察結(jié)果。多細胞腫瘤球在腫瘤學(xué)和腫瘤免疫學(xué)研究中的應(yīng)用也在增加。

目前用于評估腫瘤球體生長和縮減的方法通常受到耗時、昂貴和、或費力的分析工作流程的限制。這可能包括熒光探針的生物學(xué)干擾，終點法分析可能錯過有見地的時間點信息，或間接生化讀數(shù)忽略有價值的形態(tài)學(xué)洞察力。
 

Vitanovski/Getty圖像

Overview
應(yīng)用說明《多球、共培養(yǎng)、3D腫瘤試驗的實時活細胞分析》描述了使用Incucyte® 活細胞分析系統(tǒng)和Incucyte® 3D多腫瘤球分析來研究3D腫瘤多球的生長，可與成纖維細胞或免疫細胞共培養(yǎng)，捕捉采用單時間點方法可能錯失的數(shù)據(jù)。增強型景深明場（DF-明場）圖像采集能夠?qū)ι�長在細胞外基質(zhì)（Matrigel™）上的多腫瘤球進行長時間成像。
 

Incucyte® 活細胞分析系統(tǒng)

這一優(yōu)越的圖像采集可獲得具有高對比度的明場圖像，明場目標的大小、計數(shù)和偏心度會隨時間自動繪制，提供關(guān)于腫瘤球形成和生長速率的豐富的信息。可采集、分析及繪制數(shù)千張圖像，可以同時運行多達六塊96孔板，以提高通量。

   檢測工作流程   
 

本文展示了驗證方法和數(shù)據(jù)，以闡述Incucyte® 活細胞分析系統(tǒng)的能力，包括動態(tài)可視化和量化基質(zhì)細胞對腫瘤多球形態(tài)及對化療藥物敏感性的影響，并評估免疫細胞介導(dǎo)的對腫瘤多球的殺傷毒性。

- 活細胞分析表明，SK-BR-3與NHDFs共培養(yǎng)時可形成更緊密的多球體
- 活細胞成像顯示NHDFs對MDA-MB-231多球形態(tài)的時間效應(yīng)
- 闡明一組乳腺腫瘤多球體的細胞類型特異性時間生長曲線
- 在96孔板完成實時化合物分析的能力
- 實時動態(tài)可視化和定量抗體依賴性細胞介導(dǎo)的對靶腫瘤多球的細胞毒性（ADCC）的能力
- 赫賽汀激活的PBMC導(dǎo)致HER2陽性多球體活力的濃度依賴性喪失

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數(shù)據(jù)結(jié)果搶先看
 

Incucyte® S3孔板視圖可以快速可視化和定量處理效果。MCF7細胞與NHDFs共培養(yǎng)，接種于預(yù)包被（Matrigel）的平底96孔板（1:1比例，各1000細胞/孔），形成多球（3天）。然后用已知的標準護理和梯度稀釋的細胞毒性化合物處理球體（5天）。Incucyte® 微孔板視圖顯示了處理對多球大小的影響。頂部圖像顯示處理后5天明場目標面積（Brightfield Object Area，μm2）識別mask（黃色）。底部圖像顯示每孔總明場目標面積（Total Brightfield Object Area，μm2）（y軸）隨時間的變化（處理后0–5天）（x軸）。
 

赫賽汀誘導(dǎo)的PBMC對多球增殖的影響。將穩(wěn)定表達核RFP（SKOV3-NR、MCF7-NR）或胞質(zhì)GFP（BT-474-CyG）的腫瘤細胞接種于平底96孔板的Matrigel上（1000細胞/孔），形成多球體（3天），然后加入新分離的PBMC（E:T，5:1）和赫賽汀。Incucyte® S3明場和熒光圖像（7天，SKOV3-NR、MCF-NR；或10天，BT-474-CyG），對比未加入PBMC（上圖）和加入PBMC（下圖）的情況下，赫賽汀對腫瘤球增殖的影響（明場mask顯示為黃色）。注意在PBMC存在時HER2陽性（SKOV3和BT474）多球體熒光強度的損失。
 

HER-2陽性多球的ADCC免疫細胞殺傷的動態(tài)量化。腫瘤細胞接種于96孔平底板的Matrigel上（1000細胞/孔），形成多球（MS）3天。一旦形成，MS與新鮮分離的PBMCs（E:T，5:1）共培養(yǎng)，并用連續(xù)稀釋的赫賽汀處理。時間進程顯示多球體的死亡，通過球體明場目標內(nèi)熒光強度的損失進行量化。赫賽汀的濃度響應(yīng)曲線顯示HER2陽性多球體（SKOV3和BT-474）之間的敏感性差異。激活的T細胞群（抗CD3和IL-2，10 ng/mL）處理，導(dǎo)致了所有細胞類型的最大MS細胞毒性。每隔6小時收集數(shù)據(jù)，總計10天。每個數(shù)據(jù)點代表平均值±SEM，n=4孔。