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微生物菌種的保存與分離方法

瀏覽次數:1728 發布日期:2021-4-21  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
微生物菌種​的保存方法:
1、低溫存法:①簡單保存法,將瓊脂斜面孢子培養物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養物置于4℃冰箱保存,保存時間不超過1~2個月,若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時間可達3~4個月;②液氮超低溫保存法,將生長穩定期的細胞懸浮在10%甘油或其他低冰點液體中,密封于安瓿管內,然后控制冷卻速度,使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時,即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多數微生物如病毒、噬菌體、多種細菌、放線菌、酵母和原蟲、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物,都可用此法長期保存。

2、脫水存法:①沙土保存法,能產孢子的細菌、放線菌及霉菌可采用此法保存,即將沙和土以3:2比例混合,經稀酸處理洗凈過篩,裝入小試管內,裝置高度為1cm;滅菌2~3次,烘干后即可將在斜面培養基上生長良好的孢子,用無菌蒸餾水2~2.5ml制成孢子懸液,吸取少許加入沙土管中,經真空抽干,外觀呈松散狀態,于4℃冰箱保存,保存期可達5~7年。② 冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護劑(一般用脫脂牛奶或血清)相混合,放在安瓿管內于-20~-30℃的乙醇浴中速凍。然后,在低溫下用真空泵抽干,并用五氧化二磷或干冰使水汽結凍,熔封安瓿管,于低溫下保存。保存期可達5~10年之久。③ 石蠟油封存法,在斜面菌種培養物上,倒上滅菌后的石蠟油,高出斜面1cm,于4℃冰箱或低溫干燥處保存,此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物,保存期為一年以上。

微生物菌種​的分離方法:
(1)施加選擇性壓力分離法:主要是利用不同種類的微生物其生長繁殖對環境和營養的要求不同,如溫度、 pH 、滲透壓、 氧氣、碳源、氮源等,人為控制這些條件,使之利于某類或某種微生物生長,而不利于其他 種類微生物的生存, 以達到使目的菌種占優勢. 而得以快速分離純化的目的。 如可以控制培 養時的氧, 可將好氧微生物和厭氧微生物分開; 通過控制溫度, 可將嗜熱微生物和非嗜熱微 生物分開;控制 pH ,可將嗜酸、嗜堿微生物分離等。在分離培養基中也可以加入不同的抗 生素或試劑來增加選擇性。如在分離放線菌和細菌時,可加入抗真菌抗生素;分離真菌時, 可加入抗細菌藥物。

(2)隨機分離方法:有些微生物的產物對篩選沒有直接的選擇性指示作用,因此常采用隨機分離方法分離。 A 、抗生素產生菌的分離。抗生素產生菌的分離常用抑菌圈法。 實驗必須用工具菌:采用抗生素的敏感菌, 傳統上常用 金黃色葡萄球菌和枯草桿菌。B、抗腫瘤藥物產生菌的分離。抗腫瘤藥物產生菌的分離常用方法:生化誘導法、 SOS 生色檢測法、 DNA 修復能力突變株。 原理是利用 DNA 的損傷,微生物發生突變。

(3)目的微生物分離:A 、根據形態篩選突變株;B 、根據平板菌落生化反應篩選變株;
透明圈法、呈色圈法、抑菌圈法、渾濁圈法等。
發布者:上海邦景實業有限公司
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