正在培養的細胞狀態“突然”惡化！

在顯微鏡下觀察，感覺有黑點狀的不明物體在游動！

但沒看見懸浮物，也沒感覺培養基pH變化速度加快。

是不是支原體？­­

但支原體怎可能在低倍數顯微鏡下看得這么清楚？

難道是它？？？

科研學術圈一直流傳著這樣一種生物——它，可以污染細胞，污染后短期內不會影響貼壁生長的細胞貼壁；同時污染后的培養基也不會像細菌、真菌污染之后的培養基迅速變黃渾濁，有菌絲團漂浮在上清中。但是，沒有人能確切地說出它到底是原蟲還是其他病原微生物，也沒有一個標準的圖像記錄，不管是相機實拍還是掃描電鏡，甚至都沒人能確定到底是“黑焦蟲”還是“黑膠蟲”。

1.“黑膠蟲”究竟是什么？

有研究人員通過檢測，發現實驗室的“黑膠蟲”為變形桿菌a-2亞群，其存在于胎牛血清中。

但后又有研究表明“黑膠蟲”并非生物，而是一種碳酸鈣納米顆粒或硅復合物，稱其為“硅小體”，來源于培養基對玻璃細胞培養器皿的侵蝕。

在“黑膠蟲血清”的說法流行后，也有研究者表明自己實驗室相似的情況出現原因是由于細菌污染，并從被“黑膠蟲”污染的細胞培養基中分離到了一株短波單胞菌屬的新菌株[1]。實際上，并不是所有的細菌污染馬上就會導致細胞立即死亡，也不是所有的污染會讓培養基變黃且渾濁，相反有時細菌污染會讓培養基變得更紅（細菌分解蛋白質產胺會導致pH值上升因此變紅）。

很多人猜測，所謂的“黑膠蟲”可能只是凋亡小體或細胞碎片，因為細胞狀態好的時候就看不到了，而當顆粒物直徑足夠小，在液體中做不規則的布朗運動也很正常。盡管到目前，關于黑膠蟲究竟是什么仍無定論，但我們應盡量避免“黑膠蟲”污染。

2、如何避免或應對“黑膠蟲”污染？

• 采用原裝進口特級胎牛血清。
• 出現問題的培養體系中的血清，有很多是經過熱滅活處理的，熱滅活操作會使血清中產生線狀的蛋白質聚合體，因其顆粒較小進行布朗運動便被認定為是生物，所以在進行血清融化的過程中要進行梯度處理，最好在4℃緩慢融化

3.如果遇到“黑膠蟲”污染怎么辦？

• 換優質胎牛血清。
• 停止熱滅活處理血清，目前大部分高品質血清都不需要熱滅活操作，甚至通常因為較高溫度處理后，血清質量受影響，細胞生長速率降低。同時熱滅活過的血清，蛋白等沉淀物的形成顯著增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染。所以在不是做免疫學研究或昆蟲細胞培養等特殊場景時，血清盡量不經熱滅活。
• 雖說是“黑膠蟲”，但是其實有很大可能性是被其他微生物污染，如果對細胞狀態影響很大，正常情況下應該直接丟棄，若細胞非常珍貴，可以用伯氨奎、磺胺、四環素、貝尼爾，慶大霉素進行洗滌。并盡早更換品質好的一次性細胞培養耗材以及相關培養試劑。