細胞為啥總是一言不合就抱團生長？！

是細胞污染了還是正常現象？

是消化不好了還是鋪板有問題？

抱團細胞越來越多，怎么樣才能讓細胞分開生長？

請認真閱讀以下干貨，看看能否幫您答疑解惑！

一、細胞抱團一定代表細胞狀態不好嗎？

細胞生長的時候肯定是要相互聯系，大部分的細胞都是要成片生長的，應該仔細觀察每種細胞的狀態，抱團并不一定代表不好：

1. 若細胞輪廓清晰，可看清楚一個個的細胞，像葡萄一樣，一串串的，是狀態好的，說明細胞在分裂。

2. 但大部分細胞抱團絕對不是一件好事！如果輪廓消失，出現細胞融解或細胞變灰暗、透光性變差，就是細胞死亡了。葡萄狀和抱團，在鏡下其實很容易區別。抱團死亡的細胞可以看到細胞碎片，如下圖：

   

   ▲ 細胞抱團

3. 細胞抱團是因為細胞污染了嗎？一般細胞培養液清亮，就不是污染。如果是污染了的話，可以通過觀察培養液顏色，若污染，則很渾濁。

1. 細胞死亡釋放出DNA，纏繞其他細胞，形成黏性的細胞團（消化的過程可能過于粗暴，吹打太用力，消化太久，消化液太強或有毒性等）。

2. 細胞離心速度過大或時間太長。

3. 消化不完全的時候，細胞和細胞之間的連接沒有分開；消化過度的時候，圓形的細胞容易聚堆，再分開很困難！

4. 狀態不好、老化的細胞，也可能會出現抱團生長的情況（比如換液不及時、長的太滿才傳代、污染等造成的細胞狀態差）。

5. 傳代時沒有吹打均勻，細胞團多，培養時就會是一團一團的。

6. 傳代后細胞鋪板不均勻。

7. 有可能是雜細胞，或者死細胞。

8. 接種不均勻，或者是細胞未消化開。

9. 非震蕩培養或細菌（胞）量過多的話就會成團。

1. 用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞。

2. 對于貼壁非常牢固的細胞（如MDCK），為了細胞更好的狀態，更漂亮的樣子，建議分多批多次消化，這樣才能最大限度地降低胰酶對細胞的損傷，保證細胞的狀態能夠最優。

3. 細胞生長密度不要太高，70%－80％就好（細胞剛剛基本成單層細胞，沒有出現成層生長），這樣細胞抱團的幾率就大大減少了。如果細胞已經長成集落，可先將細胞低密度傳代，第二天再消化傳代，這樣連續傳三次，細胞抱團就會越來越小，這樣幾代過后，再按照常規消化方法和時間能將細胞逐漸傳成單個的。

4. 消化過程中最好不要使勁搖動培養瓶，這樣細胞特別容易成屑樣脫落。細胞一旦脫落入懸液里就很難再將他吹打成單個（因為細胞沒有受力點了，所以細胞很難分散開）。所以必須要在細胞未脫落之前將其吹打開，嚴格控制好消化程度。

1. 如果細胞抱團不影響生長就沒問題，只是計數時較麻煩。在消化時，可在細胞由多角形變成圓型之前，用手輕磕培養瓶的側壁，使細胞從壁上脫落（最好不要吹打，對細胞形狀和生長都不好）。 

2. 如果感覺有死細胞的DNA，在細胞懸液中加入幾滴無菌的DNAse（1mg/ml溶于水）將DNA鏈打斷。輕柔地吹打細胞，防止對細胞膜造成物理損傷。

3. 如果細胞抱團是肉眼可見的，可讓細胞靜置半分鐘左右，然后吸取上半部分沒有抱團的細胞懸液來傳代。如果細胞抱團肉眼不可見，目前還沒有特別好的分離方法，只能等細胞狀態改善后將這部分細胞慢慢排除出去。

引起細胞抱團的根本原因是細胞狀態變差，且在吹打細胞的時候，那些狀態好的細胞也會因為多次吹打而受損，所以我們認為最根本的解決方法是摸透培養的細胞的生長習性，讓細胞保持較好的生長狀態。
 

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