Horizon HD-BioP3主要特征
 

（1）知識(shí)產(chǎn)權(quán)明確：覆蓋質(zhì)粒，細(xì)胞，基因編輯技術(shù)，無(wú)后顧之憂

（2）遺傳背景清晰：基因工程技術(shù)路線成熟，位點(diǎn)特異，全基因組測(cè)序結(jié)果公開(kāi)

（3）可追溯性強(qiáng)：生產(chǎn)歷史清晰，外源致病因子/GS功能/病毒檢測(cè)完善，cGMP保存記錄標(biāo)準(zhǔn)完整

（4）生產(chǎn)穩(wěn)定：在無(wú)需任何優(yōu)化的情況下混合克隆1~1.5克/升以上，單克隆2~3克/升以上，優(yōu)化后表現(xiàn)可達(dá)7~9克/升

（5）兼容性好：無(wú)綁定銷售，適應(yīng)于多種商業(yè)化的、化學(xué)定義的、無(wú)動(dòng)物成分的培養(yǎng)基

（6）商業(yè)授權(quán)靈活：多種授權(quán)方式，支持與CRO/CDMO合作

（7）全球廣泛認(rèn)可：全球70多家藥物研發(fā)機(jī)構(gòu)授權(quán)使用，6個(gè)藥物獲批美國(guó)FDA IND申報(bào)（2018年第一個(gè)）

谷氨酰胺合成酶（GS）缺失的CHO-K1設(shè)計(jì)原理
·谷氨酰胺是細(xì)胞必須氨基酸；谷氨酰胺合成酶 （GS） 是一種催化谷氨酸和氨產(chǎn)生谷氨酰胺的酶，是細(xì)胞中谷氨酰胺產(chǎn)生的唯一途徑；谷氨酰胺合成酶（GS）功能缺失的情況下，細(xì)胞依賴外源性谷氨酰胺存活
·蛋氨酸硫氧胺（MSX）常被用于抑制谷氨酰胺合成酶（GS），然而蛋氨酸硫氧胺（MSX）具有毒性，在后期藥物生產(chǎn)過(guò)程中是不能使用的，相比利用MSX進(jìn)行的篩選，使用無(wú)谷氨酰胺合成酶（GS）的細(xì)胞能提高篩選的效率，提高蛋白產(chǎn)量，可實(shí)現(xiàn)一步篩選獲得高產(chǎn)細(xì)胞克隆的目標(biāo)
·表達(dá)重組蛋白和外源的谷氨酰胺合成酶（GS）的質(zhì)粒載體可穩(wěn)定轉(zhuǎn)染進(jìn)無(wú)內(nèi)源谷氨酰胺合成酶(GS)的細(xì)胞，去除對(duì)培養(yǎng)基中添加谷氨酰胺的依賴；通過(guò)無(wú)谷氨酰胺的培養(yǎng)基富集成功轉(zhuǎn)染的陽(yáng)性細(xì)胞，從而達(dá)到陽(yáng)性細(xì)胞篩選的目的
·因此谷氨酰胺合成酶（GS）篩選法是目前行業(yè)生產(chǎn)蛋白藥的首選技術(shù)平臺(tái)

基因敲除功能驗(yàn)證

當(dāng)轉(zhuǎn)移到缺乏谷氨酰胺的培養(yǎng)基中時(shí)，野生型CHO細(xì)胞仍然存活，而GS-/-細(xì)胞無(wú)法存活。然而，當(dāng)轉(zhuǎn)移到補(bǔ)充了4mM谷氨酰胺的培養(yǎng)基中時(shí)，兩個(gè)細(xì)胞系的生長(zhǎng)速度相當(dāng)。
Horizon的GS敲除 CHO K1細(xì)胞正在全球超過(guò)15個(gè)機(jī)構(gòu)中進(jìn)行獨(dú)立評(píng)估。其中一些評(píng)估結(jié)果使得我們已經(jīng)獲得部分可用于分享的重組蛋白表達(dá)相關(guān)的細(xì)胞工藝開(kāi)發(fā)數(shù)據(jù)，包括單克隆抗體和雙特異性抗體。盡管現(xiàn)階段在培養(yǎng)過(guò)程中仍在進(jìn)行大量?jī)?yōu)化，但我們始終一直在收到超過(guò)預(yù)期的表達(dá)報(bào)告。

HD-BIOP3與野生型CHOK1細(xì)胞對(duì)比

轉(zhuǎn)染含有單克隆抗體GS表達(dá)載體后，將細(xì)胞培養(yǎng)在無(wú)谷氨酰胺的培養(yǎng)基中篩選，相比于通過(guò)MSX篩選的野生型CHO K1細(xì)胞系統(tǒng)，GS缺失的細(xì)胞表達(dá)顯著提高的蛋白產(chǎn)量。此數(shù)據(jù)來(lái)自于在5L反應(yīng)器中的穩(wěn)定混合克隆庫(kù)的表現(xiàn)。

穩(wěn)定的混合庫(kù)表達(dá)
 

不同載體細(xì)胞表現(xiàn)測(cè)試，細(xì)胞轉(zhuǎn)染了一個(gè)單克隆抗體的質(zhì)粒，該質(zhì)粒載體包含了來(lái)自ProteoNic的UnicTM元件。對(duì)穩(wěn)定的混合克隆進(jìn)行補(bǔ)料培養(yǎng)，可延長(zhǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)時(shí)間，同時(shí)維持一個(gè)較好的VCD。在穩(wěn)定的混合克隆，生物仿制藥IgG的表達(dá)量可達(dá) 2g/L以上。

單克隆表達(dá)
 

對(duì)來(lái)自于上面穩(wěn)定的混合克隆庫(kù)的400個(gè)單克隆細(xì)胞進(jìn)行篩選和產(chǎn)量評(píng)估。3個(gè)克隆的表達(dá)量在>5g/L 。該項(xiàng)目未經(jīng)任何優(yōu)化的過(guò)程，后期優(yōu)化后將獲得更加表現(xiàn)。