酶標(biāo)記的抗原或抗體稱(chēng)為結(jié)合物（conjugate）�？乖�由于化學(xué)結(jié)構(gòu)不同，可用不同的方法與酶結(jié)合，如為蛋白質(zhì)抗原，基本上可參考抗體酶標(biāo)記的方法。制備抗體酶結(jié)合物的方法通常有以下幾種。

 1.戊二醛交聯(lián)法：戊二醛是一種雙功能團(tuán)試劑，可以使酶與蛋白質(zhì)或其他抗原的氨基通過(guò)它而偶聯(lián)。戊二醛交聯(lián)可用一步法（如連接AP），也可用二步法（如連接HRP）。戊二醛一步法操作簡(jiǎn)便、有效，而且重復(fù)性好。缺點(diǎn)是交聯(lián)時(shí)分子間的比例不嚴(yán)格，大小也不一，影響效果。制備HRP抗體結(jié)合物也可用二步法，即先將HRP與戊二醛作用，透析除去戊二醛，在pH9.5緩沖液中再與抗體作用而形成酶標(biāo)抗體。此法的效率可高于一步法l0倍左右。

 2.過(guò)dian酸鹽氧化法：本法只用于HRP的交聯(lián)。該酶含18%碳水化合物，過(guò)dian酸鹽將其分子表面的多糖氧化為醛基。用***鈉（NaBH4）中和多余的過(guò)dian酸。酶上的醛根很活潑，可與蛋白質(zhì)結(jié)合，形成an摩爾比例結(jié)合的酶標(biāo)結(jié)合物。有人認(rèn)為此法為辣根過(guò)氧化物酶交聯(lián)zui有效的方法。但也有只認(rèn)為由于所用試劑較為劇烈，各批實(shí)驗(yàn)結(jié)果不易重復(fù)。