簡介
自動細胞成像是一種分析化合物對包括細胞形態(tài)，活力和標志物表達在內(nèi)的細胞表型的影響的有效方法。這里，我們將展示ImageXpress® Pico自動細胞成像系統(tǒng)和CellReporterXpress 自動成像分析軟件如何應(yīng)用于化合物影響的表型分析。成像和分析方法可提供工具來鑒定細胞活力，細胞形態(tài)，細胞黏附和伸展，細胞骨架完整性和線粒體膜電位等多種參數(shù)。

圖 1：多參數(shù)分析細胞活力和形態(tài)學(xué)的圖像和分析圖例。用多種藥物處理 HeLa 細胞 72 小時然后，使用核染料 (Hoechst 33342) ，Actin 細胞骨架染料 ( AlexaFluor 488 (AF488) 標記的鬼筆環(huán)肽 ) 還有線粒體染料 (MitoTracker Orange CMTMRos) 染色。代表性的圖像和分析圖例展示了對照細胞和 0.1 μM staurosporine 處理后的細胞的對比。細胞使用 ImageXpress Pico 系統(tǒng)的 DAPI, FITC 和 TRITC 通和 10x PlanFluor 物鏡拍攝。圖像 ( 上 ) 標記了細胞核 ( 藍色 )，actin 細胞骨架 ( 綠色 )，還有線粒體 ( 桔色 )。圖像使用 CellReporterXpress 軟件中為了定量鬼筆環(huán)肽陽性細胞 ( 中 ) 和 MitoTracker Orange 陽性細胞 ( 下 ) 而優(yōu)化的 Cell Scoring 分析模塊進行分析。分析結(jié)果圖例如圖所示 ( 淺綠= actin-陽性的核，深綠 = actin細胞骨架，藍色 = 線粒體-陽性核，紅色 = 線粒體-陰性核，桔色 = 完整線粒體。

細胞可實時分別使用 DAPI，F(xiàn)ITC 還有TRITC 通道對 Hoechst, Calcein AM 還有 MitoTracker Orange 染色進行成像。用 10x 物鏡來拍攝每孔中一個視野的圖像為單獨一張圖像。曝光時間設(shè)為DAPI 通道 20 ms，F(xiàn)ITC 通道 10 ms，TRITC 通道 200 ms。細胞也可以固定后以后成像或進一步染色額外細胞標志物。注意：Calcein AM 用來評估活細胞且固定以后檢測不到 ( 數(shù)據(jù)未展示 )。MitoTracker Orange 和 Hoechst 33342染色固定后是穩(wěn)定的。為鑒定 actin 細胞骨架完整性，進而將細胞固定。Mitotracker Orange 和 Hoechst33342 染色后，使用 4% 甲醛溶液固定細胞然后用 PBS 洗兩遍。而后用DPBS + 0.01% saponin + 1% FBS 對細胞膜進行穿孔處理 10 分鐘。AlexaFluor® 488(AF488) 連接的鬼筆環(huán)肽染料用來評估細胞骨架完整性。鬼筆環(huán)肽用穿孔緩沖液 (1:50) 稀釋并與細胞一起在 37 度孵育 2 小時。細胞用 PBS 洗滌然后使用 CellReporterXpress 軟件中為定量 AF488 染色的細胞骨架優(yōu)化的 Cell Scoring 分析模塊進行成像分析。使用 ImageXpress Pico 系統(tǒng)成像活細胞或固定細胞，并用 CellReporterXpress軟件進行分析。細胞圖像使用兩個 CellScoring 程序進行分析：一個以 FITC 作為標記來定量 Calcein AM 或鬼筆環(huán)肽陽性細胞數(shù)，第二個程序以 TRITC 為標記分析線粒體染色陽性細胞。兩套程序都以核染色進行細胞計數(shù)和核特征鑒定。

使用自動成像分析定量分析表型影響

一個典型的自動化細胞實驗流程包括在微孔板中鋪細胞，化合物處理細胞，和自動化成像。對于多色，多參數(shù)實驗，Calcein AM 可用于鑒定活細胞數(shù)或完好的細胞數(shù)，描述細胞伸展和鑒定細胞形態(tài)學(xué)。核染料用于細胞計數(shù)，確定增殖和測量核亮度和形狀。