免疫組化實驗所需試劑

    1）PBS緩沖液（pH7.2~7.4）：NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L.

    2）0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液（CB,pH6.0,1000ml）：檸檬酸三鈉 3g,檸檬酸 0.4g.

    3）0.5mol/L EDTA緩沖液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O,用10 mmol/L NaOH調至pH8.0,加水至1000ml.

    4）1mol/L的TBS緩沖液（pH8.0）：在800ml水中溶解121gTris堿，用1N的HCl調至pH8.0,加水至1000ml.

    5）酶消化液： a、0.1%胰蛋白酶液：用0.1%CaCl2（pH7.8） 配制。 b、0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制。

    6）3%甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。

    7）封裱劑：

    a、甘油和0.5mmol/L碳酸鹽緩沖液（pH9.0~9.5）等量混合；

    b、油和TBS（或PBS）配制。

    8）TBS/PBS pH9.0~9.5,適用于熒光顯微鏡標本；pH7.0~7.4適合于光學顯微鏡標本。

    免疫組化實驗操作流程：

    1、脫蠟和水化

    脫蠟前，應將組織芯片在室溫中放置60分鐘或60℃恒溫箱中烘烤20分鐘。

    1）組織芯片置于二甲苯中浸泡10分鐘，更換二甲苯后再浸泡10分鐘；

    2）無水乙醇中浸泡5分鐘；

    3）95%乙醇中浸泡5分鐘；

    4）70%乙醇中浸泡5分鐘；

    2、抗原修復

    用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織芯片。

    1）抗原熱修復

    （1）高壓熱修復 在沸水中加入EDTA（pH8.0）或0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液（pH6.0）。蓋上不銹鋼高壓鍋的蓋子，但不進行鎖定。將玻片置于金屬染色架上，緩慢加壓，使玻片在緩沖液中浸泡5分鐘，然后將蓋子鎖定，小閥門將會升起來。10分鐘后，去除熱源，置入涼水中，當小閥門沉下去后打開蓋子。本方法適用于較難檢測或核抗原的抗原修復。

    （2）煮沸熱修復 電爐或者水浴鍋加熱0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液（pH6.0）至95℃左右，放入組織芯片加熱10~15分鐘。

    （3）微波熱修復 在微波爐里加熱0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液（pH6.0）至沸騰后將組織芯片放入，斷電，間隔5~10分鐘，反復1-2次。適用的抗原有：AR,Bax,Bcl-2,C-fos,X-jun,C-kit,C-myc,E-cadherin,Chromogranin A,Cyclin,ER,Heat shock protein,HPV,Ki-67,MDMZ,p53,p34,p16,p15,P-glycoprotein,PKC,PR,PCNA,ras,Rb,TopoismeraseⅡ等。

    2）酶消化方法 常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液。胰蛋白酶使用前預熱至37℃，切片也預熱至37℃，消化時間約為5~30分鐘；胃蛋白酶消化37℃時間為30分鐘。適用于被固定遮避的抗原，其中有：Collagen,Complement,Cytokeratin,C-erB-2,GFAP,LCA,LN等。

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