流式實驗即將開始，“分析樣品”你準備好了？
一、細胞的準備
試驗一：組織培養細胞的細胞準備
材料
完全培養基 流式細胞儀染色液 15或50ml尖底離心管
實驗過程
1． 對于懸浮培養的細胞，把細胞分裝到一個尖底離心管中，對細胞進行計數和活性分析，然后進入步驟3；
2． 對于貼壁培養的細胞，用完全培養基從培養皿上吹起并吹散細胞凝聚物，然后把細胞分裝到一個尖底離心管中，對細胞進行計數和活性分析，進入步驟3；
3． 離心細胞然后用流式細胞儀染色液重懸細胞使其終濃度為2×107個細胞/ml。
試驗二：淋巴組織的細胞準備
材料
60×15 mm 組織培養皿
3 ml注射器
細胞濾網（血液尼龍濾網）
流式細胞儀染色液
15或50ml尖底離心管
實驗過程
1． 采集組織（采集組織（脾，淋巴結，胸腺）放進一個細胞培養皿中，用3 ml注射器的活塞擠壓以制成單細胞懸液，此過程用10ml的染色緩沖液；
2． 加入10ml染色液收集細胞，使細胞懸液通過尼龍濾網以除去成團的細胞和細胞碎片，收集細胞懸液于尖底離心管中；
3． 4℃離心細胞懸液4-5分鐘（300-400g），棄掉上清液；
4． 重懸細胞沉淀，細胞計數和活性分析；
5． 按照步驟3離心細胞然后用合適體積的染色液重懸細胞，使細胞終濃度為2×107個細胞/ml。
試驗三：非淋巴組織的細胞制備
材料
剪刀或者手術刀片
PBS
60×15 mm 組織培養皿
3 ml注射器
細胞濾網（血液尼龍濾網）
流式細胞儀染色液
15或50ml尖底離心管
實驗過程
1． 采集組織，用剪刀或手術刀切成2-4mm的小塊；
2． 按照酶的使用說明書，加入適量用PBS稀釋的酶，孵育。
3． 用移液管輕輕吹散細胞，并用濾網過濾除去成團的細胞和細胞碎片；
4． 4℃離心細胞懸液4-5分鐘（300-400g），棄掉上清液；
5． 用PBS重懸細胞沉淀以移除剩余的酶溶液；
6． 重復步驟4；
7． 重復步驟5和6；
8． 用流式染色液重懸細胞沉淀，細胞計數和活性分析；
9． 按照步驟4離心細胞然后用合適體積的染色液重懸細胞，使細胞終濃度為2×107個細胞/ml。
二、用淋巴組織細胞懸液在流式細胞儀上分析以前，最好去掉紅細胞。
試驗一：鼠脾細胞中紅細胞的裂解：
材料
1×PBS
eBioscience 紅細胞裂解液
50ml 尖底管
1． 采集小鼠的脾臟并且制成單細胞懸液；
2． 4℃ 離心沉淀細胞（300-400g），棄掉上清液；
3． 用5ml脾的紅細胞裂解液重懸細胞；
4． 室溫震蕩孵育4-5分鐘（也可在冰上進行）；
5． 加入20-30ml PBS 停止反應；
6． 4℃ 離心沉淀細胞（300-400g），然后用合適體積的緩沖液重懸細胞沉淀，繼續下一步試驗；
7． 細胞計數。
試驗二：小鼠血液的紅細胞裂解
材料
1×PBS
eBioscience 紅細胞裂解液(Cat.No.00-4333)
50ml 尖底管
1． 1ml小鼠血液中加入10ml 紅細胞裂解液；
2． 室溫震蕩孵育4-5分鐘（也可在冰上進行）；
3． 加入20-30ml PBS 停止反應；
4． 4℃ 離心沉淀細胞（300-400g），然后用合適體積的緩沖液重懸細胞沉淀，繼續下一步試驗；
5． 細胞計數。
試驗三：人外周血中紅細胞的裂解
材料
1×PBS
eBioscience 紅細胞裂解液
50ml 尖底管
1． 1ml人的血液中加入10ml 紅細胞裂解液；
2． 室溫孵育10分鐘（不要超過15分鐘）；
3． 加入20-30ml PBS 停止反應；
4． 4℃ 離心沉淀細胞（300-400g），
然后用合適體積的緩沖液重懸細胞沉淀，繼續下一步試驗；
5． 細胞計數。
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網 電話：021-64166852;13621656896 E-mail：info@bio-equip.com