亚州综合一区_啪啪av大全导航福利_韩国一级片免费看_国产对白做受_夜夜躁很很躁日日躁2020_第一色网站

English | 中文版 | 手機版 企業登錄 | 個人登錄 | 郵件訂閱
當前位置 > 首頁 > 技術文章 > 培養基選用常見問題

培養基選用常見問題

瀏覽次數:5033 發布日期:2008-12-10  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
一、如何選用培養基?
選擇培養基沒有一定標準,有幾點建議可供參考:
  1. 建立某種細胞株所用的培養基應該是培養這種細胞首選的培養基。可以查閱文獻,或在購買細胞株時咨詢。
  2. 本單位慣用的培養基不妨一試,許多培養基可以適合多種細胞。
  3. 根據細胞株的特點、實驗的需要來選擇培養基。如小鼠細胞株多選1640;進行細胞雜交、基因轉移實驗,可選擇IMDM。
  4. 用多種培養基培養目的細胞,觀察其生長狀態,可以用生長曲線、集落形成率等指標判斷,根據實驗結果選擇最佳培養基,這是最客觀的方法,但比較繁瑣。
二、選擇便宜的培養基品種成本就低嗎?
  1. 通常,培養基可以適合多種細胞,細胞也可以在不同培養液中生長;例如在MEM中培養的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。
  2. 培養基養份不同會導致細胞生長效果不同,病毒或蛋白表達不同,應該選擇效果最好的培養基,考慮生物制品的綜合成本;
  3. 最終目的是追求生物制品的得率——得率高則成本低。
三、L-谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎?它在溶液中不穩定嗎?
    L-谷氨酰胺在細胞培養時是重要的,脫掉氨基后, L-谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來源,參與蛋白質的合成和核酸代謝。 但L-谷氨酰胺在溶液中不穩定,在高溫下會分解成吡咯烷酮和羧酸,也有一些毒降解產物如NH4+會不可逆轉地損壞細胞壁。
    L-谷氨酰胺在不同溫度、不同pH值條件下的穩定性研究如下。


四、為什么培養基中可以省去酚紅?
    酚紅在培養基中被用來作為pH值的指示劑,研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用(特別是雌激素),為避免固醇類反應,用無酚紅培養基。
五、在新鮮培養基中添加了血清和抗生素后,有效期是多長?

    一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時,您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。
六、為什么不要用碳酸氫鈉調pH值?
    如圖所示,培養基pH值隨著碳酸氫鈉量的增加,呈拋物線增長,當碳酸氫鈉加到一定量時,pH變化越來越小。而培養基的滲透壓值隨著碳酸氫鈉量的增加,呈直線增長,碳酸氫鈉量越大,滲透壓值越大。
    如果為了達到工作pH值僅加入少量的碳酸氫鈉,而忽略滲透壓,一來可能會達不到緩沖效果而引起細胞培養過程中pH值變化較劇烈,二來會使培養基成為低滲溶液,在培養細胞時易造成細胞膨脹破裂;如果為了達到工作pH值而加入大量碳酸氫鈉,一來可能會難以達到期望的pH值,二來會使培養基成為高滲溶液,在培養細胞時易造成細胞萎縮。
    生產中最好通過實驗找到合適滲透壓和pH值情況下的碳酸氫鈉加入量。下面是DMEM(HED)和MEM培養基的碳酸氫鈉與pH值、滲透壓的曲線。
DMEM(HED)培養基
    
MEM培養基
    

七、細胞生長質量很好,為什么病毒、蛋白表達量沒有提高?
    細胞生長質量高是高表達的必要條件。
    采用細胞生產的疫苗是體外培養一定量的動物細胞并接種病毒,利用病毒在細胞內增殖,得到預期的病毒抗原,然后制成疫苗。細胞生長質量包括細胞密度和形態,沒有好的細胞生長質量就不可能有高的表達量。
    但要注意的是,細胞生長質量好、密度厚度大時候病毒接種量也應該相應增大,表達量才會提高,否則前期的高質量細胞培養就可能浪費了。
    同時病毒、蛋白的表達、分泌在一定濃度下可能會飽和,因此如欲獲得高表達,還須研究合適的收液時間和次數。
八、污染是培養基質量不好引起的嗎?
  1. 培養基不是無菌產品,但有菌落數量控制。
  2. 培養基在使用前通過高壓或過濾滅菌。
  3. 防止污染應該注意以下事項:
A.從污染的源頭開始
  • 確認工作細胞庫是否被污染:用細菌、真菌及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。
  • 確認毒種工作種子批是否被污染:用細菌、真菌及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。
  • 確認所用培養基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染:用細菌、真菌及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。實際生產中,可以從配制好的培養液中取少量加入營養瓊脂于恒溫培養箱內培養,48小時即可觀察有無污染。
    一些單位在使用血清時候往往不經過過濾除菌處理便直接加入到培養液中,可能帶來污染。
  • 其它:高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證,確保滅菌和除菌效果;前者應在投產前及其后的每6個月進行驗證,后者應在每次除菌前、后進行驗證工作(至少應在除菌后進行一次)。
  • 另外,應將有毒區與無毒區嚴格分開,并有各自獨立的空氣凈化系統及孵室,有毒區對無毒區應保持相對負壓,防止病毒對培養細胞(尤其是細胞庫)的污染。
B. 從GMP管理、SOP操作方面加強管理力度
  • 每二周(或每周)對無菌操作室及潔凈區域按GMP要求進行檢測
  • 人員的GMP管理和無菌操作強化培訓
C. 一些特殊情況
  • 細菌的大小從0.1-700μm,為防止細小細菌的污染,過濾除菌應盡量采用0.1μm的濾膜或濾芯。
  • 大面積污染時,應對所有設施、用具及操作環境進行徹底消毒。
 

用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊 忘記密碼
評論只代表網友觀點,不代表本站觀點。 請輸入驗證碼: 8795
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:info@bio-equip.com
主站蜘蛛池模板: 经典国产一区 | 日韩黄色免费在线观看 | 李丽珍三级a做爰全过裸体 精品中文久久 | 亚洲看黄 | com.国产 | 欧美精美视频 | 国产黄成人免费观看 | 麻豆视频网 | 亚洲欧美另类久久久精品2019 | 在线一区二区三区精品 | 高潮影院 | 欧美黑人xxxⅹ高潮交 | 淫欲的代价2在线播放 | 男人用嘴添女人下身免费视频 | 国产综合久久99久久 | 欧美激情性a片在线观看不卡 | 美女扒开胸罩给男生图片 | 久久天天躁狠狠躁夜夜AV浪潮 | 久久精品—区二区三区 | 手机看片日韩精品 | 中国高清av | 7777ssss免费观看 | 久久久久无码精品国产H动漫 | 亚洲国产精品精品 | 羞羞视频免费在线看 | 1024国产在线观看 | 国产亚洲精久久久久久蜜臀 | 我和亲妺妺乱的性视频 | 国产香蕉av| 99久久免费精品高清特色大片 | 国产aⅴ无码专区亚洲av | MM1313亚洲国产精品 | 国产成人精品在线 | 男女视频在线播放 | 久久精品国产亚洲七七 | 91中国少妇被黑人xxxxx | 日韩黄色一级视频 | 国产精彩视频一区二区三区 | 美女站立式x0x0又黄动态图 | 免费日韩高清 | 成人无码av片在线观看 |