DNA甲基化是表觀遺傳學(Epigenetics)的重要組成部分,在維持正常細胞功能、遺傳記、胚胎發育以及人類腫瘤發生等方面起著重要的作用。MeDIP-seq是研究甲基化DNA一個非常有效的方法,能富集基因組上所有甲基化C進行測序分析。包括啟動子區、內含子、外顯子、基因間,甚至是一些重復序列,并能分析這些區域各自的甲基化程度。
DNA甲基化測序實驗流程:樣品檢測--樣品制備--cluster制備--上機--基本數據處理--生物信息分析。
DNA甲基化測序生物信息分析:
1) 原始數據產出統計;
2) MeDIP-Seq產出序列與基因組比對;
3) 基因組上檢測到的Peak統計(峰數目,峰分布,峰寬度等);
4) 特定區域Genome Browser可視化信息;
5) 每個樣本的unique mappable reads 的分布情況(在重復區域、基因區、基因間區的分布覆蓋);
6) 提供與樣本Peak相關的基因列表;
7) Peaks相關基因Gene Ontology功能分類;
8) 多個樣本間Peaks相關基因差異統計分析;
DNA甲基化測序樣品要求:
1. 要求打斷后DNA長度在100-500bp 范圍內,主峰在200-300bp,最佳長度在250bp 左右,請提供相應的檢測膠圖。
2. 樣品純度:260/280值應在1.8~2.0之間,沒有蛋白、多糖和RNA污染;
3. 樣品濃度:樣品的濃度不低于 50ng/μl;
4. 樣品完整性:DNA樣品沒有降解;
5. 樣品需求量:文庫制備起始量為5μg,多次制備樣品總量=樣品制備次數*5μg;但是,送樣量需>10μg,以防止運輸途中樣品損耗與其他不可預測的損失;
6. 對于非人來源的其它物種DNA,至少需提供兩對驗證引物(分別用于檢驗甲基化及非甲基化DNA片段的富集效果)。
7. 如果條件限制只能提供一對引物或不能提供引物,我們可以用內參對MeDIP產物進行檢測,但無法直接對客戶的樣品進行精確的QC檢測,因此需要客戶自行確認是否繼續建庫。
8. 樣品保存:選擇酒精、TE buffer或超純水一種,請在樣品信息單中注明。
9. 樣品運輸:為防止運輸過程中樣品粘到管壁上造成損失,請將樣品置于不黏管中(如 Eppendorf LoBind Tube 或 Ambion Non-stick Tube),使用封口膜封好。建議使用干冰運輸,并選用較快的寄送方式。
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